臺(tái)州off-target脫靶檢測(cè)評(píng)估

GUIDE-Seq脫靶評(píng)估技術(shù)的優(yōu)勢(shì)分析鼓潤(rùn)致力于基因組編輯工具脫靶的分析檢測(cè)工作，為篩選、優(yōu)化基因組編輯工具的保真性提供標(biāo)準(zhǔn)化的分析。我們脫靶分析具有如下優(yōu)勢(shì)：實(shí)用性強(qiáng)：能反映CRISPR在真核細(xì)胞中進(jìn)行基因編輯的在靶與脫靶情況，以進(jìn)行安全性和有效性評(píng)價(jià)；檢測(cè)通量高：一次能檢測(cè)多個(gè)樣本的在靶與脫靶情況，并通過(guò)優(yōu)化的標(biāo)簽設(shè)計(jì)，降低實(shí)際的測(cè)序reads數(shù)量；準(zhǔn)確性高：絕大部分檢測(cè)結(jié)果可被驗(yàn)證；靈敏度高：能夠高效檢測(cè)出低頻脫靶位點(diǎn)，檢測(cè)低至0.1%的脫靶突變；實(shí)驗(yàn)難度低：操作過(guò)程簡(jiǎn)單易行細(xì)胞適應(yīng)性強(qiáng)?；蚓庉嫾夹g(shù)脫靶檢測(cè)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專(zhuān)業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。臺(tái)州off-target脫靶檢測(cè)評(píng)估

基于已有科學(xué)經(jīng)驗(yàn)和既往非臨床/臨床研究結(jié)果，如果認(rèn)為基因修飾細(xì)胞所采用的載體系統(tǒng)可將外源基因整合到細(xì)胞基因組中并可在體內(nèi)長(zhǎng)期存續(xù)，需綜合分析以上風(fēng)險(xiǎn)因素，評(píng)估潛在的插入突變、致瘤/致性風(fēng)險(xiǎn)。非臨床研究，應(yīng)采用具有代表性的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行基因整合位點(diǎn)分析，分析細(xì)胞的克隆組成以及在關(guān)注基因（如liu相關(guān)調(diào)控基因）附近有無(wú)優(yōu)先整合跡象，含有關(guān)注整合位點(diǎn)的細(xì)胞有無(wú)優(yōu)先異常增殖。對(duì)于嵌合抗原受體（Chimericantigenreceptor，CAR）或T細(xì)胞受體（Tcellreceptor，TCR）修飾的免疫細(xì)胞，應(yīng)盡可能采用多種方法評(píng)估其靶點(diǎn)相關(guān)毒性和脫靶毒性風(fēng)險(xiǎn)。臺(tái)州off-target脫靶檢測(cè)評(píng)估脫靶檢測(cè)CRO，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專(zhuān)業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。

不論在科研還是臨床中，CRISPR技術(shù)的使用都帶來(lái)了非常高的回報(bào)，也同時(shí)伴隨著各種風(fēng)險(xiǎn)，這其中脫靶現(xiàn)象就研究者們較為擔(dān)心的一類(lèi)風(fēng)險(xiǎn)。本文中我們盤(pán)點(diǎn)了多種主流的CRISPR脫靶位點(diǎn)檢測(cè)方法，但沒(méi)有一種方法是適用于所有CRISPR技術(shù)的脫靶檢測(cè)，一個(gè)項(xiàng)目中只使用一種脫靶檢測(cè)方法也是不足夠的。如何在實(shí)驗(yàn)中，特別是臨床試驗(yàn)中多方面評(píng)估CRISPR的脫靶風(fēng)險(xiǎn)，需要將多種脫靶檢測(cè)方法有效組合。同時(shí)，每一條sgRNA都不可避免地存在脫靶位點(diǎn)，如何評(píng)估這種風(fēng)險(xiǎn)，如何降低這種風(fēng)險(xiǎn)，具體的解決方案我們用臨床實(shí)例來(lái)為大家介紹。

不同基因zhiliao產(chǎn)品的特殊考慮。關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產(chǎn)品，例如轉(zhuǎn)座子元件、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉(zhuǎn)座子的載體在體外修飾的細(xì)胞，長(zhǎng)期隨訪中需格外關(guān)注基因zhiliao產(chǎn)品的基因組整合風(fēng)險(xiǎn)，建議申辦方分析基因zhiliao載體在靶細(xì)胞或相關(guān)替代細(xì)胞的基因組中整合的影響（例如是否存在克隆性生長(zhǎng)、是否存在優(yōu)勢(shì)克隆、克隆性生長(zhǎng)是否導(dǎo)致惡性liu等）。如果基因組整合相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)的分析可行，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：?在接受基因zhiliao產(chǎn)品的較初5年內(nèi)，兩次檢測(cè)間的采樣間隔建議不超過(guò)6個(gè)月。此后每年至少檢測(cè)一次，直至檢測(cè)數(shù)據(jù)表明不再存在任何安全性風(fēng)險(xiǎn)。可以與靶基因之外的其他基因作用而非特異性阻斷基因表達(dá),即產(chǎn)生非靶基因的沉默效應(yīng)。

通常不需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的遺傳毒性組合試驗(yàn)，但應(yīng)根據(jù)基因zhiliao產(chǎn)品的特點(diǎn)、產(chǎn)品的具體適應(yīng)癥、載體的已有信息、導(dǎo)入基因序列結(jié)構(gòu)等，評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品整合進(jìn)基因組的可能性，判斷是否需要開(kāi)展另外的遺傳毒性研究，如研究基因組修飾的發(fā)生情況，并檢測(cè)隨后可能發(fā)生的異常細(xì)胞行為；評(píng)估插入突變（插入位點(diǎn)、插入拷貝數(shù)等）引起的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)基因zhiliao產(chǎn)品采用基因編輯或轉(zhuǎn)座子技術(shù)時(shí)，需要關(guān)注脫靶編輯、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座印跡引起的遺傳毒性問(wèn)題；鑒定/表征基因組整合位點(diǎn)。種子基因脫靶檢測(cè)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專(zhuān)業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。上?；虔煼摪袡z測(cè)分析

選擇潛在的脫靶位點(diǎn)，例如選擇gRNA預(yù)測(cè)網(wǎng)站上Top 5潛在脫靶位點(diǎn)，進(jìn)行Sanger測(cè)序單克隆；臺(tái)州off-target脫靶檢測(cè)評(píng)估

基因編輯產(chǎn)品除了適用基因zhiliao產(chǎn)品的一般考慮以及整合性載體的特殊考慮外，長(zhǎng)期隨訪中還應(yīng)額外關(guān)注脫靶風(fēng)險(xiǎn)，量化評(píng)估脫靶活性和在靶活性之間的相關(guān)性，或利用在靶活性來(lái)預(yù)測(cè)脫靶活性的水平。在開(kāi)發(fā)過(guò)程中應(yīng)同時(shí)關(guān)注基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、脫靶效率、插入突變情況、目的基因在靶細(xì)胞中整合位點(diǎn)及表達(dá)。評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品整合進(jìn)基因組的可能性，判斷是否需要開(kāi)展另外的遺傳毒性研究，評(píng)估插入突變（插入位點(diǎn)、插入拷貝數(shù)等）引起的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。需要關(guān)注脫靶編輯、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座印跡引起的遺傳毒性問(wèn)題；鑒定/表征基因組整合位點(diǎn)。非臨床研究是藥物開(kāi)發(fā)的重要環(huán)節(jié)之一。臺(tái)州off-target脫靶檢測(cè)評(píng)估