HE染色注意事項(xiàng):1、染色時(shí)調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時(shí)間長(zhǎng),組織酸化而影響細(xì)胞核著色。因此,要在自來(lái)水中沖洗時(shí)間長(zhǎng)一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,這樣可以使細(xì)胞核著色較深。染伊紅時(shí)胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。2、切片染蘇木精后,分色這一步是關(guān)鍵,應(yīng)在顯微鏡下控制進(jìn)行,一般以細(xì)胞核染色清楚(晰)而細(xì)胞質(zhì)基本無(wú)色為佳。如果過(guò)分延長(zhǎng)分色時(shí)間將導(dǎo)致染色太淺,應(yīng)重新染色后再行分色。3、切片經(jīng)酒精脫水后,入二甲苯時(shí)可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài),此為脫水不徹底,應(yīng)將切片退回?zé)o水酒精,更換酒精、二甲苯,以求徹底脫水與透明。4、在染色過(guò)程中不要讓切片干燥,以免切片收縮、變形,影響神經(jīng)元形態(tài)。5、切片從二甲苯取出或進(jìn)入二甲苯前,切片周邊均應(yīng)擦干凈或吸干多余水分。6、***封固時(shí),要用中性樹(shù)脂,防止日后褪色,蓋片要選大于組織塊的面積,如漏出一部分不久將會(huì)褪色,所用樹(shù)脂濃度要適當(dāng),樹(shù)脂封固時(shí)不能有氣泡。什么是HE染色,HE染色實(shí)驗(yàn)的目的。山西質(zhì)量好的HE染色價(jià)格
HE染色反藍(lán)的原理:蘇木素染液,細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,兩條鏈上的磷酸基向外,帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木素精堿性染料以離子或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。 分化:蘇木素染色之后,用水洗去未結(jié)合在細(xì)胞上的染液,但是在細(xì)胞核中結(jié)合過(guò)多的染料和細(xì)胞漿中吸附的染料必須用分化液1%鹽酸酒精脫去,才能保證細(xì)胞核和細(xì)胞漿染色的分明,把這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為染色的分化作用。因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu),使色素與組織解離,分化不可過(guò)度。藍(lán)化:分化之后蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài),而呈藍(lán)色,所以分化之后用水洗去酸而中止分化,再用弱堿性水使蘇木精染上的細(xì)胞核變呈藍(lán)色,稱(chēng)藍(lán)化作用,一般多用自來(lái)水浸洗即可變藍(lán),也可用溫水(50度溫水比較好)變藍(lán)。新疆結(jié)果客觀(guān)的HE染色價(jià)格關(guān)于HE染色,常用的結(jié)果分析原理。
HE染色多聚甲醛保存組織的注意事項(xiàng):多聚甲醛放置過(guò)久其中的醛基可能會(huì)被氧化為酸,使溶液pH降低,從而影響染色。不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類(lèi)以及組織塊的大小來(lái)調(diào)整固定時(shí)間。多聚甲醛雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時(shí)間過(guò)久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過(guò)24小時(shí)。多聚甲醛可長(zhǎng)期存在于固定過(guò)的細(xì)胞或組織樣品中,固定完成后用適當(dāng)?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時(shí)仍會(huì)有殘留,因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如果受醛基影響,須盡量洗去殘留的多聚甲醛。醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%多聚甲醛固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。
HE染色堿染料染主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著色。學(xué)上常用的一種染色方法為蘇木精 伊紅染色法。蘇木精 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡(jiǎn)稱(chēng)HE染色法 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿 ,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色 ;伊紅為酸染料 ,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸顆粒呈強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白液體呈粉紅色。HE染色觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)變化。
HE染色不管怎么操作,始終無(wú)法染色或淡染答:這種情況一般因?yàn)榻M織固定時(shí)采用了酸性甲醛;或者組織在甲醛中浸泡時(shí)間太長(zhǎng);或者久置的甲醛變性分解為甲酸。補(bǔ)救:防患于未然,要么使用新鮮的中性甲醛固定,要么在存放的甲醛中加一點(diǎn)碳酸鈉中和甲酸。對(duì)于已經(jīng)固定的組織可考慮再次固定;對(duì)于已經(jīng)制出的片子,染色前采用5%重鉻酸鉀溶液浸泡半小時(shí)以上,然后自來(lái)水漂洗5min,可改善染色。也可以將切片放入3%硫酸鐵銨溶液中,補(bǔ)充染色媒介,增強(qiáng)蘇木素與組織的親和力(蘇木素染色必須要媒介才能染上,單純的蘇木素與組織的親和力很弱)??蒲谐鋵?shí)驗(yàn)操作之HE染色。廣西質(zhì)量好的HE染色
比較基礎(chǔ)的病理染色HE染色。山西質(zhì)量好的HE染色價(jià)格
HE染色法,。蘇木精染液為堿 ,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色 ;伊紅為酸染料 ,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。而線(xiàn)粒體用HE染色不可見(jiàn),活細(xì)胞通常要求活細(xì)胞近似無(wú)色線(xiàn)粒體需要用健那綠來(lái)染色,再在高倍鏡下觀(guān)察。從人或動(dòng)物新鮮尸體上取下塊(一般厚度不超過(guò)0.5厘米)投入預(yù)先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液等)使、細(xì)胞的蛋白質(zhì)變凝固,以防止細(xì)胞后的自溶或細(xì)菌的分解,從而保持細(xì)胞本來(lái)的形態(tài)結(jié)構(gòu)。一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,逐漸脫去塊中的水份。再將塊置于既溶于酒精,又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明,以二甲苯替換出塊的中酒精,才能浸蠟包埋。山西質(zhì)量好的HE染色價(jià)格