x @ -FAgo過濾器(或等效過濾器)建議在保溫瓶和真空源之間使用,例如o保護真空源免受污染?!駥⒄婵掌窟B接到真空源的真空管●前肢●封閉劑,例如脫脂/低脂干奶(0.5%以下),酪蛋白,牛血清白蛋白(BSA)或其他市售的封閉劑,例如blok * -CH緩沖液(請參閱表5)抗體(單克隆和/或多克?。?,檢測試劑●洗滌緩沖液:Tris或磷酸鹽緩沖鹽溶液,pH 7.4,補充了Tween @ 20表面活性劑(TBST)或PBST)●轉(zhuǎn)移蛋白的印跡吸筆座尺寸比較大印跡尺寸(厘米)多印跡4.5 x8.4小型的7.5 x 8.48.5 x 13.5。 一般準則●如果蛋白質(zhì)已經(jīng)轉(zhuǎn)移到已經(jīng)干燥的PVDF膜上,請用100%重新潤濕印跡甲醇,然后在組裝前用蒸餾水沖洗。如果蛋白質(zhì)已轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜干燥后,用蒸餾水重新益啟生物提供專業(yè)的細胞計數(shù)器。長寧區(qū)MerckAmicon攪拌式過濾器Merck儀器報價
項卡(圖8)創(chuàng)建和啟動自定義協(xié)議。要手動控制流量,使用“手動模式”標簽選擇所需的井,壓力,和溫度(如果使用加熱歧管)。有關(guān)自動化協(xié)議或每次融合的手冊,請參閱CellASICO《ONIX2微流體系統(tǒng)用戶指南》。注意:對于需要快速交換溶液的實驗,請執(zhí)行以下操作可以應(yīng)用以下技術(shù):高壓(55.2kPa[8psi)下的流量對于初始過渡,然后將流量減小到標準壓力長期暴露于6.9-13.8kPa(1-2psi)。 軟件操作下圖顯示了使用ellAsICEONX2軟件進行實驗的兩種模式,請參閱CllASICEONIX2MicrofuidieSystem用戶有關(guān)軟件功能的詳細信息的指南。圖7.手動模式降低了ONIX2系統(tǒng)的迭代操作??梢允謩釉O(shè)置操作參數(shù),此模式a5o提供了選項運行簡短的自動印版設(shè)置序列,這些序列奉賢區(qū)Merck細胞計數(shù)器Merck儀器銷售上海益啟生物的聯(lián)系電話。
有關(guān)詳細信息,請參見表2?!癫唤ㄗh在SNAP i.d. @ 2.0系統(tǒng)中剝離印跡。印跡已被剝離可以從阻塞步驟開始在SNAP i.d.o 2.0系統(tǒng)中對遵循標準協(xié)議的系統(tǒng)進行重新探測?!袢绻恍枰獎冸x(例如,如果使用其他二抗進行檢測),則可以重新檢測印跡快速清洗后,立即在SNAP i.d.9 2.0系統(tǒng)中使用。 優(yōu)化準則抗體已經(jīng)開發(fā)了優(yōu)化指南,以使用戶能夠轉(zhuǎn)換所用抗體的濃度將標準免疫檢測測定法濃縮至適用于SNAP i.d. @ 2.0系統(tǒng)的濃度。大多數(shù)用戶會能夠使用相同量的抗體,但與標準品相比,體積更小,濃度更高免疫檢測。但是,當(dāng)使用擴展抗體方案(第12頁)時,可以使用相同的方法通常用于標準免疫檢測的一抗的濃度,體積和時間,其次是較高濃度的二抗,持續(xù)時間較短。表1.如何根據(jù)SNAP i.d.9
預(yù)先裝有特定于印版的默認設(shè)置。這些設(shè)置順序可以編輯如果需要圖8.協(xié)議編輯器模式允許創(chuàng)建和編輯實驗協(xié)議。協(xié)議由一系列環(huán)境組成控制和/或每個融合步驟??梢愿鶕?jù)需要添加和更改步驟。準備好協(xié)議后,可以使用“運行”選項卡來執(zhí)行它。在下面概述的培養(yǎng)方案示例中,通過將壓力(27.6kPa[4ps]持續(xù)15秒)固定到孔組中,將ells從8孔加載6和8通過以345kPa(5psi)的流速流動4和5孔5分鐘,將未捕獲的細胞從腔室中沖洗掉。接下來的孔被灌注從孔1提取30分鐘的基線洗滌液或生長液。將Cls從孔2暴露于誘導(dǎo)劑1小時,然后將誘導(dǎo)劑用H2O沖洗掉。從1孔中洗滌或生長溶液30分鐘。在第3孔中對第二個誘導(dǎo)劑重復(fù)上述??兩個步驟。CAX2-MXT20歧管,使用setpaintof37吧。 規(guī)格產(chǎn)品訂購信息,續(xù)培上海益啟生物細胞跨膜電阻儀訂購方便。
白的免疫檢測:SNAP i.d.“ 2.0系統(tǒng)與SNAP 1.d.系統(tǒng)(首先代)與標準免疫檢測一種。 SNAPi.d。 2.0蛋白質(zhì)檢測b??煺盏鞍踪|(zhì)檢測。標準系統(tǒng)Midi印跡系統(tǒng)首先代,單孔免疫檢測對照,茴香霉素處理和PDGF處理的3T3小鼠成纖維細胞裂解液(10-0.63 ug)被轉(zhuǎn)移到Immobilon9-P膜上。印跡被阻止含0.5%的非脂肪干mik(NFDM),并在加筋的鹽水中制備含0. 1%Tweene 20表面活性劑(TBST),并用主要抗B-Tubulin探測(MAB3408)和次級HRP偶聯(lián)的山羊螞蟻(AP1 24P)在上述條件。將印跡暴露于X射線膠片一分鐘。圖2. erbB2的免疫檢測:SNAP i.d.9 2.0系統(tǒng)與SNAP i.d.系統(tǒng)(首先代)與標準免疫檢測s。 S上海益啟細胞跨膜電阻儀訂購方便。奉賢區(qū)Merck細胞計數(shù)器Merck儀器銷售
上海益啟生物的細胞跨膜電阻儀詢價聯(lián)系方式。長寧區(qū)MerckAmicon攪拌式過濾器Merck儀器報價
盤,請在步驟5之后插入托盤。有關(guān)詳細信息,請參閱“抗體恢復(fù)”部分。 6.在整個表面上涂適量的一抗吸墨紙架的數(shù)量(對于MultiBlot為2.5毫升,對于迷你吸墨紙為5毫升,或10 mL用于Midi印跡)。7.在室溫下孵育10分鐘。解決方案將是吸收到污點固定器中,表面可能會變干。重要提示:請勿在吸塵器清潔后再使用真空吸塵器。孵育10分鐘。8.向下壓框架并施加真空。等待5-8秒,直到框架完全是空的。9.在連續(xù)運行真空的情況下,添加30 mL洗滌緩沖液(MultiBlot為15毫升)。重復(fù)洗滌步驟3次以上(總共4次洗滌)。當(dāng)框架完全為空時,將TURN真空關(guān)閉。10.在印跡架的表面上涂適量的二抗(對于多印跡,為2.5 mL,5毫升用于迷你印跡,或10毫升用于Midi印跡)。在室溫下孵育10分鐘,然后長寧區(qū)MerckAmicon攪拌式過濾器Merck儀器報價