低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法

細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿，使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。根據(jù)細胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基。2、制備PEI-DNA混合物：以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管，一管將質(zhì)粒DNA（總量2-8μg為佳）加入240μLHBS中，混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中，輕輕搖動平皿混勻，置于含5％～7％CO2的37℃溫箱孵育。注：每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻，保證所取的濃度一致。3、培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)，16h左右可以觀測到報告基因的表達。PEI轉(zhuǎn)染試劑主要成分是什么？低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量：請務必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。如想申請PEI試用裝，歡迎關注公眾號：Mine-bio，回復“申請PEI”，即可參加！上海全球PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理用PEI轉(zhuǎn)染試劑為什么會出現(xiàn)沉淀？

產(chǎn)品特點：PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式（LinearPolyethylenimineHydrochloride），是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品。相比于PEI25K，PEIMAX40K：1.完全水解（去乙酰化）；2.鹽酸鹽形式，具更高的水溶特性；3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段，其質(zhì)子化氮水平比PEI25K提高11%以上。應用領域：PEIMAX40K（cat#24765）是一款非GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑，適用于基礎學術(shù)研究和藥物研發(fā)早期階段，以固體粉末形式提供，需用戶自行配置（詳情見使用方法）。歡迎關注曼博生物公眾號：Mine-bio

PEIMAX-----高產(chǎn)工業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑-高度濃縮，可制備大量轉(zhuǎn)染試劑Polysciences轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的產(chǎn)品，因其較高的轉(zhuǎn)染效果，已大量應用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個碳原子，即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑，它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細胞。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時轉(zhuǎn)染試劑。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑，大量科學家選擇PEIMAX，在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉(zhuǎn)染試劑。多年以來，經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評審的公開研究和出版文獻表明，在HEK293、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率，在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高，可靠性強。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應器持續(xù)的高基因表達細胞體系，實現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度。而且與大多數(shù)細胞轉(zhuǎn)染方案相比，使用PEIMAX至少可降低40%轉(zhuǎn)染成本（部分案例可降低90%轉(zhuǎn)染成本）。如何優(yōu)化PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染時的比例？

PEIMAX粉末配置方法：1)將1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃燒杯中；2)放入攪拌轉(zhuǎn)子，放置于磁力攪拌器上，設置攪拌程序以形成一個較小的漩渦；3)等待PEIMAX40K完全溶解，通常需要5分鐘左右；4)用25mL塑料移液管加入1N氫氧化鈉滴定至pH6.9~7.1；5)如果不小心超過7.1，則使用1N的鹽酸和新的塑料移液管將pH重新滴定至6.9~7.1；6)將溶液轉(zhuǎn)移到1L玻璃量筒中，加入水定容至1L；7)用無菌真空過濾膜過濾配制的轉(zhuǎn)染試劑溶液；8)按需分裝，4°C儲存（切記不可冷凍）；注：未經(jīng)配制的粉末有效期為2年。配置成液體后分裝在合適的瓶子中，并且保存在4℃的轉(zhuǎn)染試劑將可在6個月之內(nèi)保持性能。如jin用于蛋白定性研究，分裝的轉(zhuǎn)染試劑可延長有效使用期至1年。
PEI轉(zhuǎn)染試劑的主要分子量是多少呢？293細胞PEI轉(zhuǎn)染試劑品牌

誰知道Polysciences的轉(zhuǎn)染試劑怎樣？低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法：1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關于Kyfora Bio by Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品問題，歡迎咨詢上海曼博生物！低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法