2019國自然基金解析—甲基化研究專題。從生命科學(xué)部和醫(yī)學(xué)科學(xué)部總體來看：2019年度，生命科學(xué)部獲自然科學(xué)基金委批準(zhǔn)資助6478項(xiàng)（不含杰出青年基金項(xiàng)目），批準(zhǔn)資助金額共計(jì)，單項(xiàng)平均資助金額。2019年度，醫(yī)學(xué)科學(xué)部共批資助10138項(xiàng)（不含杰出青年基金項(xiàng)目），批準(zhǔn)資助金額共計(jì)，單項(xiàng)平均資助金額。從甲基化研究方向來看，與甲基化研究相關(guān)的項(xiàng)目總數(shù)達(dá)283項(xiàng)，項(xiàng)目總金額超過12669萬元。其中生命科學(xué)部項(xiàng)目總數(shù)62項(xiàng)，項(xiàng)目金額3235萬元，醫(yī)學(xué)科學(xué)部項(xiàng)目總數(shù)221項(xiàng)，項(xiàng)目金額9434萬元。從2011-2019年甲基化研究方向的項(xiàng)目金額和項(xiàng)目數(shù)目分析，整體呈上升趨勢；從醫(yī)學(xué)科學(xué)部來看，甲基化研究項(xiàng)目獲批數(shù)量221項(xiàng)，項(xiàng)目金額達(dá)到9434萬，較之2018年度項(xiàng)目獲批金額（7166萬元）上升趨勢尤為明顯，可以看出，甲基化研究日益成為國自然的研究熱點(diǎn)。 通過甲基化數(shù)據(jù)與耐藥基因Panel數(shù)據(jù)聯(lián)合分析。遼寧hMeDIP-Seq技術(shù)服務(wù)售后服務(wù)
甲基化-焦磷酸測序（升級版）之前的儀器是Q96，也就是說同時可以上96個反應(yīng)，但是有效讀長只有50bp左右（50bp之后開始衰減，后面的序列只能作為參考）；升級版的Q48，也就是48孔，每次上48個反應(yīng)，但有效長度可以到100bp左右，而且之前很多不能測過去的特殊結(jié)構(gòu)，現(xiàn)在大部分也能測了。甲基化--------焦磷酸測序的優(yōu)勢。樣品要求·樣品類型細(xì)胞、新鮮組織或DNA樣品·樣品量細(xì)胞樣品請?zhí)峁┲辽?×106個細(xì)胞，組織樣品請?zhí)峁┲辽?00mg的組織塊或切片，DNA樣品請?zhí)峁?μg以上的DNA·樣品質(zhì)量基因組DNA無明顯降解，主帶清晰，大于23Kb，無明顯彌散。OD260/280值在～，濃度≥50ng/μl·樣品保存細(xì)胞樣品或新鮮組織塊（切成～50mg的小塊）可液氮凍存后，-80℃保存。DNA樣品可溶于乙醇或超純水中，-80℃保存。樣品保存期間避免反復(fù)凍融·樣品運(yùn)輸樣品置于ml凍存管中，封口膜封好。 遼寧hMeDIP-Seq技術(shù)服務(wù)售后服務(wù)WGBS用于人、哺乳動物及農(nóng)林牧漁方向的高水平甲基化研究。
芯片平臺作為目前比較成熟的篩選工具，已經(jīng)在很多領(lǐng)域有了相應(yīng)的應(yīng)用。多家芯片公司在DNA甲基化這塊兒有了相應(yīng)的產(chǎn)品提供，其中應(yīng)用**為***的就Agilent平臺和Illumina平臺，相應(yīng)的產(chǎn)品包括AgilentHumanCpGIslandMicroarrayKit，InfiniumHumanMethylation27BeadChip和InfiniumHumanMethylation450KBeadChip。另外RocheNimbleGen和Affymetrix也有相應(yīng)的芯片推出，但是NimbleGen的芯片今年下半年已經(jīng)停產(chǎn)。不同的芯片平臺，各自的實(shí)驗(yàn)過程也是不一樣的。安捷倫前期采用的甲基化DNA免疫共沉淀（MeDIP）技術(shù)。將基因組DNA分成兩份，一份用來做MeDIP，另一份作為對照。兩個樣品都標(biāo)記熒光(富集的樣品用Cy5標(biāo)記，對照用Cy3標(biāo)記)，然后與芯片雜交。芯片上每個探針的Cy5/Cy3強(qiáng)度比例顯示出該區(qū)域的甲基化程度。
Agilent甲基化芯片通過SurePrint芯片合成**技術(shù)，結(jié)合優(yōu)化的探針設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)方法，可靈活進(jìn)行甲基化研究，得到高靈敏度、高特異性、高重復(fù)性的結(jié)果。技術(shù)流程：1.將基因組DNA超聲打斷成400-500bpDN**段；2.加熱變性并將變性后的單鏈DNA樣品分成兩份；3.其中一份單鏈DNA樣品加入抗5'-甲基化胞嘧啶核苷抗體。使用免疫磁珠法分離樣品中甲基化DN**段的抗體復(fù)合物，樣品中其余的非甲基化DN**段被洗脫；4.純化免疫共沉淀的DN**段；對MeDIP(Cy5)與Input(Cy3)樣品分別進(jìn)行標(biāo)記；5.標(biāo)記后的MeDIP與Input樣品混合、變性，與芯片雜交；6.檢測雜交信號并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。芯片種類：Agilent**甲基化芯片，8x60K●和合作伙伴在Agilent公司定制的Promoter芯片。●絕大多數(shù)基因是針對基因啟動子區(qū)域的CpG島設(shè)計(jì)探針?！裥酒弦还灿?160個功能注釋比較明確的基因，其中2128個和**發(fā)生有關(guān)系?！駨墓δ苌戏?，有256基因和細(xì)胞凋亡有關(guān)，1273個基因和信號傳導(dǎo)有關(guān)，487個基因和壓力和衰老有關(guān)?！裉貏e適用于**甲基化研究。 芯片平臺作為目前比較成熟的篩選工具。
cfDNABS-Seq送樣要求一、送樣類型分離好的血漿二、保存方式分離后的血漿，用ml離心管分裝，例如：1ml/管；放-20℃冰箱中保存（短暫保存，1-2周）；放-80℃冰箱中長期保存(1年以內(nèi))；保存期間不能凍融。三、運(yùn)輸條件干冰運(yùn)輸：順豐陸運(yùn)（3-4天時間），夏季10-15公斤干冰；秋冬季10公斤干冰四、抽血要求1、使用Streck**管（不建議使用普通的EDTA-鈉抗凝管），采集10ml外周靜脈血（客戶沒有Streck**管，公司配送）；2、室溫或者放置4℃冰箱中半小時以上，不超過8小時，進(jìn)行血漿分離步驟五、血漿分離步驟1、4℃條件下以1600g離心10min，離心后將上清（血漿）分裝到2、4℃條件下以16000g離心10min去除殘余細(xì)胞，將上清移入新的離心管中，每管分裝1ml;3、血漿樣本存放于-80℃冰箱中保存;使用干冰運(yùn)輸,提取之前不能凍融。備注1：血漿分離在4℃條件進(jìn)行，如果客戶沒有冷凍離心機(jī)，也可以在室溫條件下進(jìn)行；備注2：離心后取血漿上清，避免吸取白細(xì)胞；通常10ml全血可以獲得4-5ml血漿。 甲基化驗(yàn)證是甲基化研究必不可少的一環(huán)。北京ATAC技術(shù)服務(wù)活動
DNA甲基化是生物界神奇的“帽子”。遼寧hMeDIP-Seq技術(shù)服務(wù)售后服務(wù)
Chip-Seq 是指通過染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)（ChIP）特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DN**段，并對其進(jìn)行純化和文庫構(gòu)建；然后對富集得到的DN**段進(jìn)行高通量測序，通過將獲得的數(shù)百萬條序列標(biāo)簽精確定位到基因組上，從而獲得全基因組范圍內(nèi)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的 DNA 區(qū)段信息，是目前在全基因組水平研究蛋白結(jié)合靶DNA序列的重要手段，為轉(zhuǎn)錄因子、組蛋白修飾、核小體定位等表觀遺傳學(xué)的研究提供有效方法。
應(yīng)用領(lǐng)域
1、確定組蛋白修飾的位置及其與基因表達(dá)的關(guān)系。
2、完成對轉(zhuǎn)錄因子及其它蛋白在基因組上結(jié)合位點(diǎn)的精細(xì)定位。
3、研究特定的核小體或組蛋白的分布。 遼寧hMeDIP-Seq技術(shù)服務(wù)售后服務(wù)