培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基指在液體培養(yǎng)基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基脫水培養(yǎng)基又稱(chēng)預(yù)制干燥培養(yǎng)基，指含有除水分外的一切成分的商品培養(yǎng)基。培養(yǎng)基微生物分類(lèi)編輯語(yǔ)音選擇性培養(yǎng)基：一類(lèi)根據(jù)某微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，具有使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌的功能，***用于菌種篩選等領(lǐng)域。鑒別培養(yǎng)基：一類(lèi)在成分中加有能與目的菌的無(wú)色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑，從而達(dá)到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養(yǎng)基。例如，伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基（EMB）。培養(yǎng)基常見(jiàn)培養(yǎng)基編輯語(yǔ)音細(xì)菌培養(yǎng)基牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基牛肉膏，蛋白胨，氯化鈉，瓊脂，水100ml在燒杯內(nèi)加水100ml，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉，用蠟筆在燒杯外作上記號(hào)后，放在火上加熱。待燒杯內(nèi)各組分溶解后，加入瓊脂，不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解后補(bǔ)足失水，用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH值到，分裝在各個(gè)試管里，加棉花塞，用高壓蒸汽滅菌：、121攝氏度維持15-30分鐘。牛心培養(yǎng)基細(xì)菌培養(yǎng)基取新鮮牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀細(xì)細(xì)剁成肉末后，加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在燒杯上做好記號(hào)，煮沸。血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素：一是取材對(duì)象，二是取材過(guò)程。徐匯區(qū)現(xiàn)代臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基建筑
轉(zhuǎn)用文火燉2小時(shí)。過(guò)濾，濾出的肉末干燥處理，濾液pH值調(diào)到。每支試管內(nèi)加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心，滅菌，備用。根瘤菌培養(yǎng)基葡萄糖10g，磷酸氫二鉀，碳酸鈣3g，硫酸鎂，酵母粉，水1000ml，1%結(jié)晶紫溶液1ml。先把瓊脂加水煮沸溶解，然后分別加入其他組分，攪拌使溶解后，分裝，滅菌，備用。放線(xiàn)菌培養(yǎng)基淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基（高氏一號(hào)培養(yǎng)基）可溶性淀粉，硝酸鉀，磷酸氫二鉀，氯化鈉，硫酸鎂，硫酸亞鐵，瓊脂2g，水100ml。先把淀粉放在燒杯里，用5ml水調(diào)成糊狀后，倒入95ml水，攪勻后加入其他藥品，使它溶解。在燒杯外做好記號(hào)，加熱到煮沸時(shí)加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解后，補(bǔ)足失水。調(diào)整pH值到，分裝后滅菌，備用。面粉瓊脂培養(yǎng)基面粉60g，瓊脂20g，水1000ml把面粉用水調(diào)成糊狀，加水到500ml，放在文火上煮30分鐘。另取500ml水，放入瓊脂，加熱煮沸到溶解后，把兩液調(diào)勻，補(bǔ)充水分，調(diào)整pH值到，分裝，滅菌，備用。微藻培養(yǎng)基BG-11培養(yǎng)基NaNO3，K2HPO4·，MgSO4·，CaCl2·CitricAcid（檸檬酸），F(xiàn)erricammoniumcitrate（檸檬酸鐵銨，EDTA(dinatrium-salt)，Na2CO3，A5+Cosolution*（A5溶液1000×）1mlDistilledWater。嘉定區(qū)提供臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基服務(wù)費(fèi)并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)。
二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至，若pH值超過(guò)，則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌μm孔徑濾膜濾過(guò)處理。三、血清培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無(wú)菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體，置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類(lèi)、時(shí)間而定，一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制，可選用無(wú)血清培養(yǎng)基。四、***素為防止培養(yǎng)時(shí)期細(xì)菌的污染，可在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)***素，一般用量與組織細(xì)胞培養(yǎng)相同：卡那霉素100單位/毫升，或雙抗--青霉素100單位/毫升，鏈霉素100微克/毫升。五、植物血凝素（PHA）非增殖期的細(xì)胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細(xì)胞，但在離體培養(yǎng)過(guò)程中，在PHA的作用下，可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞而進(jìn)入有絲分裂。經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44-48小時(shí)和68-72小時(shí)。PHA有粘多糖，蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂，蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA***的細(xì)胞數(shù)隨其濃度而增加，直至全部免疫活性細(xì)胞均被***為止，但PHA濃度過(guò)高會(huì)引起凝集，一般采用4%濃度為好。
且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、***、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或***生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。血清主要作用1．提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類(lèi)物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。2．提供***和各種生長(zhǎng)因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)***（氫化可的松、**）、類(lèi)固醇***（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。3．提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及***等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用。4．提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。5．對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，則有目的的使用血清來(lái)終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被***用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí)，粘度起到重要作用。證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的***物。
對(duì)培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基用，℃條件下維持15-30min可達(dá)到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過(guò)程中，長(zhǎng)時(shí)間高溫會(huì)使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞，如使糖類(lèi)物質(zhì)形成氨基糖、焦糖，因此含糖培養(yǎng)基常在，℃15-30分鐘進(jìn)行滅菌，某些對(duì)糖類(lèi)要求較高的培養(yǎng)基，可先將糖進(jìn)行過(guò)濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合；長(zhǎng)時(shí)間高溫還會(huì)引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽(yáng)離子（特別是鈣、鎂、鐵離子）結(jié)合形成難溶性復(fù)合物而產(chǎn)生沉淀，因此，在配制用于觀(guān)察和定量測(cè)定微生物生長(zhǎng)狀況的合成培養(yǎng)基時(shí)，常需在培養(yǎng)基中加入少量螯合劑，避免培養(yǎng)基中產(chǎn)生沉淀，常用的螯合劑為乙二胺四乙酸（EDTA）。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進(jìn)行滅菌，然后再混合，避免形成沉淀；高壓蒸汽滅菌后，培養(yǎng)基pH會(huì)發(fā)生改變（一般使pH降低），可根據(jù)所培養(yǎng)微生物的要求，在培養(yǎng)基滅菌前后加以調(diào)整。在配制培養(yǎng)基過(guò)程中，泡沫的存在對(duì)滅菌處理極不利，因?yàn)榕菽械目諝庑纬筛魺釋?，使泡沫中微生物難以被殺死。因而有時(shí)需要在培養(yǎng)基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產(chǎn)生，或適當(dāng)提高滅菌溫度。WHO公布的《用動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求。徐匯區(qū)個(gè)人臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基售后服務(wù)
有些國(guó)家還要求牛血清來(lái)自未用過(guò)反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。徐匯區(qū)現(xiàn)代臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基建筑
然后在同樣溫度下有光照和全黑暗下培養(yǎng)3周直至愈傷組織形成（兩種情況各置3瓶）。觀(guān)察愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率。***分化及植株再生培養(yǎng)將誘導(dǎo)的愈傷組織按類(lèi)型分別轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上,置于連續(xù)光照，溫度20-22℃條件下培養(yǎng)3周，統(tǒng)計(jì)愈傷組織再生植株情況。愈傷組織誘導(dǎo)的總體情況***愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)4周后，愈傷組織基本形成，即排除因生長(zhǎng)時(shí)間不夠而未形成愈傷的情況。具體情況見(jiàn)表一中所示。6瓶培養(yǎng)物均有愈傷形成，且都未發(fā)生污染，但誘導(dǎo)率幾乎各不相同。其中，在光照條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為，在黑暗條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為。由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，外植體即***葉片取得偏小，接種時(shí)可能已有部分外植體的大部分細(xì)胞脫水死亡，使整個(gè)實(shí)驗(yàn)的愈傷組織誘導(dǎo)率偏低,愈傷塊偏小。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI1640培養(yǎng)基是一個(gè)全營(yíng)養(yǎng)型培養(yǎng)基，***應(yīng)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，如人骨髓瘤細(xì)胞、鼠雜交瘤細(xì)胞、人白細(xì)胞以及B細(xì)胞和T細(xì)胞。**初設(shè)計(jì)用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)和人白血病細(xì)胞的單層細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)基編輯語(yǔ)音選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。徐匯區(qū)現(xiàn)代臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基建筑
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