外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,可通過細胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體,內(nèi)涵體與細胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間,其中包含RNA、蛋白質(zhì)、microRNA、DN**段等多種物質(zhì),存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和母乳等多種體液中。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史,雖然較初被認為可能是細胞的“垃圾”,所以才被排出來,但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進行細胞間信息傳遞。如今,研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中、一些病癥細胞發(fā)生的發(fā)展、神經(jīng)細胞信號轉(zhuǎn)導過程中都發(fā)揮著重要作用。專利申請利用分離培養(yǎng)人尿液來源細胞并收集培養(yǎng)基來進行體外培養(yǎng)。外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:無需沉淀試劑,也無需過夜培養(yǎng)。徐州外泌體提取試劑單價
外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進行消化,經(jīng)水浴、反復輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程,包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡(TEM)、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦外泌體的提取方法:多聚物沉淀法。
外泌體在肺病進程中的作用:在一些病癥微環(huán)境中,一些病癥細胞來源的外泌體能夠誘導CD4+T分化為調(diào)節(jié)性T細胞,壓制機體的抗一些病癥免疫反應;肺病細胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,可在免疫細胞中結(jié)合并啟動TLR8,使TLR介導的NF-κB信號通路活化,從而導致一些病癥的生長和轉(zhuǎn)移。在肺病的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中,細胞間通訊扮演著重要的角色。據(jù)有關(guān)報道稱,NSCLC分泌的外泌體內(nèi)TGFβ和IL10的高表達與肺病的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。此外,啟動的T細胞可以通過調(diào)控Fas信號通路增加基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)的表達,進而促進肺病的轉(zhuǎn)移。這些機制有望成為肺病治病的潛在靶點。雖然大多數(shù)外泌體都是促進一些病癥的侵襲與轉(zhuǎn)移,但也有報道稱,外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細胞的轉(zhuǎn)移與增殖。如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物。
具膜囊泡,當我們使用常規(guī)方法分離這些結(jié)構(gòu)時不推薦使用其他的名稱來稱呼它們。外泌體(exosome)適用于通過特殊手段拿到的由胞內(nèi)體來源的釋放到細胞外的膜泡結(jié)構(gòu)。建議對細胞外囊泡進行細分時使用物理上的界定如小細胞外囊泡(sEV)和中/大細胞外囊泡(m/lEV),或者高密度囊泡(highdensity)和低密度囊泡(lowdensity)等,同時也建議使用表面蛋白來界定如CD63+CD81+細胞外囊泡等。當使用exosomes等稱呼時應當進行嚴謹?shù)膶嶒炞C明使用的“exosomes樣品”是由胞內(nèi)體途徑產(chǎn)生的。小和同學:都是細胞外囊泡,外泌體和微囊泡有啥區(qū)別?小光老師:外泌體和微囊泡的區(qū)別在于其生成的方式不同。從晚期內(nèi)體來源產(chǎn)生的細胞外囊泡稱為外泌體,從細胞膜直接出芽產(chǎn)生的細胞外囊泡稱為微囊泡。外泌體的提取方法:超速離心法(差速離心)。
外泌體的提取方法:1、色譜法。色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進行分離的分析的方法。樣品中大分子不能進入凝膠孔,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,首先被流動相洗脫出來;小分子可進入凝膠中絕大部分孔洞,在柱中受到更強地滯留,更慢地被洗脫出。分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。2、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì),利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細胞外泌體的一種新方法外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊。天津正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦
色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。徐州外泌體提取試劑單價
外泌體提?。撼叽缗抛枭V。尺寸排阻色譜(Size-exclusionchromatography,SEC)是基于大小而非分子量實現(xiàn)分離大分子。該技術(shù)應用填充多孔聚合物微球的柱子,分子根據(jù)其直徑通過微球,半徑小的分子需要更長的時間才能通過色譜柱的孔隙遷移,而大分子則從色譜柱中更早地洗脫。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子。此外,可以將不同的洗脫溶液應用于該方法。與離心方法相比,色譜分離已被證明具有更多優(yōu)勢,因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,這可能會改變囊泡的結(jié)構(gòu)。目前,SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中外泌體的技術(shù)。不過,該方法耗時較長,不適合大量樣本處理徐州外泌體提取試劑單價