南京鄭州鼠尾膠原

一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法：隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，各種醫(yī)用耗材的更新?lián)Q代也是日新月異。止血材料是常見的醫(yī)療器械產(chǎn)品。但是現(xiàn)今市面上的止血材料不光存在著容易引起傷口傳染的缺點(diǎn)；同時(shí)還存在著容易與傷口粘附不易去除，導(dǎo)致傷口潰爛，或者因?yàn)檎掣綄?dǎo)致傳染；再次就是止血材料多是通過(guò)吸收血液及添加凝血酶等外在因素止血，很少有止血材料是使用能夠自身具有止血性質(zhì)的材料來(lái)生產(chǎn)的?，F(xiàn)今市面上的可吸收止血材料有氧化纖維素、α-氰基丙烯酸酯類組織膠、醫(yī)用止血明膠等，但是都有各自的缺點(diǎn)。如氧化纖維素可引起組織周圍PH值升高；α-氰基丙烯酸酯類組織膠降解過(guò)程中釋放出氰和甲醛等有毒物質(zhì)；醫(yī)用止血明膠黏附性較差，易脫落，因其吸收血液后膨脹可能壓迫傷口周圍組織等。探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果。南京鄭州鼠尾膠原

鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式,為人鼻腔黏液纖毛運(yùn)輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法。方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞,培養(yǎng)7天時(shí)進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu),應(yīng)用高速攝像技術(shù)測(cè)量纖毛擺動(dòng)頻率。結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細(xì)胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細(xì)胞呈不規(guī)則多角形,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細(xì)胞間為緊密連接;同一細(xì)胞任意兩點(diǎn)纖毛擺動(dòng)頻率是相同的;同一來(lái)源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動(dòng)頻率是相同的。結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,為今后研究鼻內(nèi)用藥對(duì)纖毛除去功能的影響提供了良好的方法和途徑。南京成都鼠尾膠原堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。

生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心，簡(jiǎn)化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純。從提取原料到樣品生成過(guò)程中，進(jìn)行多次真空冷凍干燥，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉；較后由滅菌、無(wú)菌包裝，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性，降低了成本，適用于生物醫(yī)用材料，所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu)。

鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無(wú)菌10×PBS、無(wú)菌蒸餾水、無(wú)菌1MNaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積。3）在冰上放置無(wú)菌管以收存膠原蛋白I。4）在無(wú)菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計(jì)算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無(wú)菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無(wú)菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計(jì)算體積，混勻，冰上備用。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時(shí)。6）使用時(shí)，無(wú)菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉。一種基于鼠尾膠原蛋白：各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?% 2% 1%，余量的水。

鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果。方法制作鼠尾膠原，觀察全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中，自制的鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞的貼壁黏附作用。結(jié)果無(wú)鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細(xì)胞懸浮于外液，不宜封接；有鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細(xì)胞貼附于培養(yǎng)皿底壁，易于封接和長(zhǎng)時(shí)間（約8h)的觀察和記錄。鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用。結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。廈門鼠尾膠原直銷價(jià)

將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡。南京鄭州鼠尾膠原

以鼠尾膠原為支架的類似物的建立：探尋建立類似物的培養(yǎng)方法。方法：原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞，制備鼠尾膠原，將鼠尾膠原溶液、濃縮培養(yǎng)基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細(xì)胞溶液在適當(dāng)?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物。結(jié)果：形成的類似物中成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結(jié)論：①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物，該模型是進(jìn)行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ)；②成纖維細(xì)胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學(xué)特性，它是研究成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間以及細(xì)胞之間相互作用的良好模型。南京鄭州鼠尾膠原