宿主細胞DNA（HCD）殘留以染色質形式存在，其中有帶負電荷的DNA、帶正電荷及疏水區(qū)段的組蛋白，就像膠帶一樣能夠吸附很多物質，包括各種雜蛋白、色譜填料、目的病毒顆粒。非特異吸附雜蛋白，會影響蛋白雜質（如HCP）等的去除；吸附到色譜填料上，會降低色譜分離純化效率；吸附到目的病毒顆粒時，會影響目的產物的穩(wěn)定性，從而降低目的產物的得率。因此，從生產工藝層面來講，一定要去除HCD，從而能夠簡化工藝、提高目的產物的產量。SAN HQ高鹽核酸酶在高鹽濃度下活性更適，DNA去除效率更高。北京上海倍篤生物高鹽核酸酶70921-150跟其他類型的核酸酶一樣，SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶的...

Mayer等（2023）以measles virus(麻疹病毒，MV)為例，評估了四種不同核酸酶（BenzonaseTM、DeneraseTM、M-SAN HQ中鹽核酸酶及SAN HQ高鹽核酸酶）對于染色質DNA去除的效果。Vero細胞通過微載體貼壁培養(yǎng)來生產麻疹病毒MV，72hr后收獲上清液，使用3μm cellulose filter(Sartorius)過濾后分裝多份，置于-80℃保存便于后續(xù)使用。在解凍后的上清中調節(jié)對應鹽濃度，并加入50 U/ml核酸酶，37℃孵育2hr進行消化，消化后留樣；將消化后上清液過Capto Core 700 (Cytiva)柱子，收集流穿液，之后洗雜、洗脫...

細胞基因藥物的基因遞送有病毒及非病毒兩種方式，其中病毒遞送更為常用。在病毒遞送路徑中，腺相關病毒（AAV）和慢病毒（Lentivirus）是常用的兩種載體；差別是病毒基因組的存在形式，AAV的基因組一般不整合到染色體中，以游離形式存在于染色體之外，且一般會表達數(shù)年之久；而慢病毒的基因組則會整合到染色體達到長期持續(xù)表達的目的。此外，其它用于基因藥物的病毒載體有單純皰疹病毒（HSV）、痘苗病毒（Vaccina Virus）、痘病毒（Poxviruses）。在生物制品生產，如AAV載體及腺病毒載體疫苗生產中，宿主細胞DNA殘留是關鍵質量參數(shù)之一。青海500mM鹽濃度條件高鹽核酸酶70921-202經(jīng)...

一般來說，生物生產工藝用的核酸酶以BenzonaseTM（BenzonaseTM是Merck的注冊商標）為主，能高效降解任何形式（雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀）的DNA和RNA。該酶來自于大自然界普遍存在的S.Marcescen，通過E.coli發(fā)酵生產得到。該酶的適宜反應條件是低鹽濃度范圍（

核酸酶活性受到很多因素影響，如鹽濃度、pH、底物、溫度等。因此，不同客戶、不同項目中核酸酶的使用條件都不一樣。目前，生物制藥行業(yè)對Benonase全能核酸酶的使用比較熟悉，如生理鹽或低鹽濃度、脫鹽操作等。對于AdV/AAV等項目，使用SAN HQ高鹽核酸酶替代Benzonase時，只需提高反應體系總鹽濃度到400mM-500mM即可，溫度、Mg2+濃度等條件不用做任何調整，同樣酶量的SAN HQ對宿主細胞DNA（HCD）的去除效果更好、病毒載體得率更高。經(jīng)過工藝優(yōu)化后，可以將SAN HQ高鹽核酸酶的用量減少到原來的1/3-1/4，且HCD去除效果及產品得率更高。SAN HQ高鹽核酸酶的檢測標準...

一個美國客戶做了對照實驗，比較Benzonase和SAN HQ高鹽核酸酶純化病毒載體的效率。實驗設計如下，HEK293細胞轉染及培養(yǎng)后，分別取了150Million的293細胞進行裂解，分別在各自適宜的條件下（即SAN HQ組反應條件為500mM鹽濃度，而Benzonase組反應條件是150mM鹽濃度）加入等量的酶（0、2kU、3kU、4kU、5kU、6kU），37°孵育1hr，加入Picogreen染料后檢測DNA的殘留量。結果發(fā)現(xiàn)，SAN HQ高鹽核酸酶組用更少的酶得到了更好的去除效果（即2kU的SAN HQ消化結果明顯優(yōu)于6kU的Benzonase），且SAN HQ的高純化效率是非血清型...

基因療法制造商面臨的挑戰(zhàn)與抗體療法剛出現(xiàn)時單克隆抗體制造商面臨的挑戰(zhàn)相似。例如，在生產、儲存和處理過程中，單克隆抗體也會受到低滴度、產品和工藝相關雜質和降解的挑戰(zhàn)。盡管與重組單克隆抗體相比，單劑量AAV產品與工藝相關雜質相關的風險可能更低（取決于雜質的類型、劑量和給藥途徑），但這也不能忽視。由于這些相似性，制藥商、化學品和輔料供應商有機會進行合作，并開發(fā)創(chuàng)新的解決方案，以實現(xiàn)穩(wěn)健和成本效益高的AAV產品生產。GMP級別SAN HQ提供了更多的監(jiān)管保證。山東高鹽條件高鹽核酸酶70921-150殘留的宿主DNA是生產中產生的雜質，其存在潛在的致瘤性、傳染性和免疫原性等風險。相關研究表明，基因的大小...

近年來，AAV在cancer疾病的醫(yī)治中顯示出巨大的價值。AAV作為基因藥物的載體已在肺、肝、眼、腦、肌肉等多個臨床試驗(超過100次)中得到應用，并在盲癥和血友病方面取得了巨大成功。2012年，AAV1載體編碼的脂蛋白脂肪酶成為歐盟批準的shou個用于醫(yī)治脂蛋白脂肪酶缺乏癥的基因產物(Glybera)。5年后，另一種AAV介導的基因藥物(Luxturna)隨后獲準在美國上市?；贏AV9的基因療(Zolgensma)也被用于醫(yī)治脊髓性肌肉萎縮。腺病毒在基礎和實驗研究有這么強的生命力原因在于：宿主范圍廣，對人致病率低；腺病毒粒子相對穩(wěn)定，病毒基因重排頻率低；安全性高，不整合到染色體中，無插入致...

在生物工藝流程中，需要使用核酸酶去除終產品中的核酸污染，而核酸酶作為外源成份，也需要在生產流程中去除。核酸酶去除工藝包括熱滅活法、酶抑制劑、離子交換和親合層析法等。AAV衣殼亞種之間因表面電荷的差異導致不同的的等電點，——空衣殼pI在6.3左右，包裝了完整基因組DNA后的病毒顆粒pI大致為5.9。而來自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右，SAN HQ高鹽核酸酶pI 9.6左右。因此，在同樣的條件下，從AAV溶液中去除SAN HQ高鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底。ArcticZymes所有產品的開發(fā)、生產及銷售等都符合ISO13485:2016質量...

基因藥物常用的AAV載體有三種生產方法，分別是三質粒瞬轉體系、桿狀病毒表達載體體系和包裝細胞體系。其中，20多年前開發(fā)的三質粒瞬轉表達技術仍然占據(jù)腺相關病毒AAV生產的主流地位，其三質粒分別是Helper質粒（含E2a/b、E4和VARNA基因）、目標基因表達質粒及輔助質粒（含Cap和Rep基因）。雖然AAV病毒載體的血清型不同，但AAV的生產流程基本一致，主要有質粒共轉宿主細胞HEK293、293細胞生產病毒顆粒、從細胞培養(yǎng)上清或/及細胞裂解液中收獲病毒載體、純化/制劑/無菌過濾/灌裝等流程。ArcticZymes致力于提供高質量產品，具有好的批間一致性、穩(wěn)定可靠的質量。黑龍江SAN HQ高...

ArcticZymes Technologies成立于20世紀80年代后期，致力于從海洋生物中識別新的冷適應酶。ArcticZymes目標明確，推進分子研究、診斷和therapeutics領域的發(fā)展。30多年來，ArcticZymes只專注于酶學研究，匯集一批志同道合的科學家，在酶學領域追求zhuoyue、勇于創(chuàng)新。ArcticZymes開發(fā)創(chuàng)新解決方案，與客戶緊密協(xié)作，提升產品品質，從高質量到zhuoyue，達成他們的目標，重新定義生物藥生產的邊界。在ArcticZymes，我們精心設計解決方案，以從未出現(xiàn)的方式推動行業(yè)向前發(fā)展。ArcticZymes于2005年在Olso證券交易所上市，精...

ArcticZymes Technologies提供獨特特性的鹽活性核酸酶（Salt Active Nucleases，SANs）系列產品，主要包含SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶。這兩款酶都是非特異核酸內切酶，跟Benzonase一樣能高效降解任何形式（雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀）的DNA和RNA；都來自于深海microbes，通過Pichia pastoris發(fā)酵生產得到。這兩款酶的區(qū)別在于發(fā)揮酶活的適宜鹽濃度不同，——M-SAN HQ中鹽核酸酶的適宜鹽濃度在175mM-250mM，而SAN HQ高鹽核酸酶的適宜鹽濃度在400mM-600mM。US FDA指南要求：重組生物制...

市售的SAN HQ高鹽核酸酶有三個規(guī)格，分別是25kU、500kU及5MU，分別滿足研發(fā)初期及大規(guī)模生產各階段的要求。通過SDS-PAGE檢測蛋白純度在98%以上?；贏rcticZymes Technologies的30年的酶學開發(fā)及大規(guī)模生產經(jīng)驗，SAN HQ的生產體系穩(wěn)定，產品純度高，批次一致性好，無蛋白酶活性。廠家開發(fā)出特異的緩沖液體系，使SAN HQ保存起來更加穩(wěn)定，-15℃ - -30℃條件下有效期3年左右。研究數(shù)據(jù)表明，經(jīng)過5-6次的反復凍融，SAN HQ高鹽核酸酶活性沒有明顯變化。SAN HQ高鹽核酸酶的生產用原輔料是Non-animal和Non-plant來源的。北京上海倍篤...

從細胞中釋放AAV載體的基本機械技術是反復冷凍/解凍，然后是低速離心步驟然而，但是這種技術很難放大生產。機械均質，如法式壓濾，是另一種裂解方法，在這種方法中，細胞膜在高壓剪切力作用下發(fā)生破裂。雖然這種方法是可放大的，但是由于剪切應力引起的聚集和沉淀，往往會導致產品損失。而化學裂解方式，例如Triton X-100在病毒載體純化過程有較高的總收率，而且易于放大。但是也有其局限性。研究表明，Triton X-100造成了一些急性口服毒性、眼睛損傷、皮膚刺激和慢性水生毒性。因此，該去垢劑在2016年被歐洲化學品管理局（European Chemicals Agency）被列為需要高度關注的物質。Ar...

在生物工藝流程中，需要使用核酸酶去除終產品中的核酸污染，而核酸酶作為外源成份，也需要在生產流程中去除。核酸酶去除工藝包括熱滅活法、酶抑制劑、離子交換和親合層析法等。AAV衣殼亞種之間因表面電荷的差異導致不同的的等電點，——空衣殼pI在6.3左右，包裝了完整基因組DNA后的病毒顆粒pI大致為5.9。而來自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右，SAN HQ高鹽核酸酶pI 9.6左右。因此，在同樣的條件下，從AAV溶液中去除SAN HQ高鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底。SAN HQ應用于生產工藝流程中，有效去除核酸污染；截止目前，已用于全球20+臨床項目...

三種AAV載體的生產體系（三質粒瞬轉體系、桿狀病毒表達載體體系以及包裝細胞體系） 中都會出現(xiàn)三種衣殼：完整衣殼（full capsid）、部分衣殼（partial capsid），和空衣殼（empty capsid）。其中完整衣殼包含正確的DNA序列，是人們所期待的產品；部分衣殼和空衣殼包含部分不包含目的基因，屬于生產中的雜質，約占細胞生產的總AAV顆粒的50%-90%。空衣殼/部分衣殼有如下幾種危害：1), 影響產品的純度，2), 增加終產品的免疫原性，3), 與完整衣殼競爭infection細胞上的載體結合受體，抑制完整衣殼的轉導，4),增加總體病毒載量。部分衣殼與空衣殼地存在嚴重地影響了...

目前基因藥物領域常用的病毒載體有腺病毒、慢病毒、重組腺相關病毒（rAAV）以及逆轉錄病毒等，其中AAV因其免疫原性極低、安全性高、宿主細胞范圍廣、擴散能力強、表達穩(wěn)定以及特異性強等優(yōu)勢脫穎而出。據(jù)NIH統(tǒng)計，已有超過200個正在進行或已完成的基因藥物臨床試驗使用rAAV載體。盡管rAAV基因藥物已顯示出巨大的前景，但是強大、穩(wěn)健而且可放大的基因載體生產制造工藝一直是CGT行業(yè)的痛點。目前rAAV生產平臺主要有三種：三質粒瞬轉體系（TransientTransfection, TT）、桿狀病毒表達載體體系(Baculovirusexpression vector，BEV)和包裝細胞體系(Pack...

殘留的宿主DNA是生產中產生的雜質，其存在潛在的致瘤性、傳染性和免疫原性等風險。相關研究表明，基因的大小普遍在200bp以上，因此大于200bp有可能會有一定的致病性，而且殘留DNA片段越大，生物制品的風險等級越高。因此，各國監(jiān)管機構對其提出了嚴格要求。美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）在《關于人類基因zhiliao新產品生產指導文件》中明確指出HCD的片段要小于200bp。2022年5月，國家藥品監(jiān)督管理局藥品評審中心（CDE）發(fā)布的《體內基因藥物產品藥學研究與評價技術指導原則（試行）》中也明確指出需對DNA殘留量和殘留片段大小進行控制，建議盡量將DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。SA...

ArcticZymes Technologies成立于20世紀80年代后期，總部位于挪威北部的特羅姆瑟(Troms?)；立足北極海洋區(qū)，致力于從海洋生物中識別新的冷適應酶，用于分子研究、體外診斷和藥物領域。以其產品的獨特性質及超過30年的生產經(jīng)驗積淀，ArcticZymes Technologies得到國際分子診斷及生物藥物領域客戶的肯定及大力支持，ArcticZymes產品線已用于診斷產品及生物藥物生產中。2005年，ArcticZymes在Olso證券交易所上市，并且持續(xù)得到挪威國家基金的支持。在如抗體、病毒載體藥物等的生產工藝流程中，核酸雜質的去除至關重要。福建高鹽核酸酶70921-16...

AAV病毒滴度通常分為物理滴度和infection滴度。物理滴度一般是指基因組滴度或者衣殼滴度。在測定AAV的含量時，通常采用基因組滴度或者衣殼滴度作為單位，其中基因組滴度為攜帶基因組的AAV的濃度，衣殼滴度為AAV物理顆粒的濃度?；蚪M滴度一般采用qPCR、ddPCR、染料法、UV/Vis等方法來測定；衣殼滴度主要是通過ELISA、HPLC等方法來測定。AAV基因組滴度檢測的關鍵在于盡可能徹底去除AAV衣殼外的HCD殘留，減少污染核酸對qPCR或ddPCR的影響。經(jīng)典方法是加入常規(guī)核酸酶（如Dnase I、Benzonase等）消化AAV衣殼外的HCD殘留，然后加入Proteinase K破...

在不同的鹽濃度條件下，AAV病毒載體的存在形式不同。低鹽濃度條件下，AAV病毒顆粒表面會通過電荷作用等非特異結合到HCD上，從而產生病毒顆粒團聚現(xiàn)象。隨著溶液鹽濃度上升，AAV病毒顆粒與HCD的離子相互作用會被破壞，AAV病毒顆粒會逐漸解離。當鹽濃度升到更高范圍（>400mM左右），AAV病毒顆粒與HCD的結合更弱，AAV顆粒更穩(wěn)定。因此，在高鹽濃度溶液中，AAV顆粒更加穩(wěn)定，且有數(shù)據(jù)表明高鹽濃度不會削弱AAV的侵染能力。所以，我們推薦提高AAV病毒生產中的鹽濃度。宿主細胞DNA主要以染色質形態(tài)存在，其中的組蛋白通過離子相互作用及疏水相互作用與DNA緊密結合；吉林SAN HQ TF高鹽核酸酶7...

已有文獻表明，高鹽濃度能夠破壞染色質結構，讓核小體解聚。在能耐受高鹽條件的病毒載體（如AdV/AAV等）生產中，高鹽濃度使宿主細胞DNA（HCD）解聚，讓核酸片段暴露，提高了核酸片段的可及性。而ArcticZymes的SAN HQ高鹽核酸酶能夠在高鹽條件下更好發(fā)揮酶切活性，作為高鹽條件下去除HCD的更好選擇。SAN HQ高鹽核酸酶的出現(xiàn)，讓一些通過常規(guī)方法很難解決的工藝問題得到高效解決，不僅提高了生產效率，降低了藥物生產成本，更拓寬了生物工藝生產的邊界。SAN HQ高鹽核酸酶在高鹽濃度下具有較高活性。海南上海倍篤生物高鹽核酸酶70921-202相比傳統(tǒng)的Benzonase核酸酶，SAN HQ高...

宿主細胞DNA殘留的擔憂是基于致ai風險理論，特別是生產細胞系所包含的致ai序列，比如較常見腺病毒基因E1A和E1B（HEK293, PerC.6 和CAP 細胞系），人乳tou瘤病毒E6和E7基因（HeLa細胞系)等。當使用致ai細胞系生產AAV時，下游純化須盡可能減少殘留DNA。工業(yè)上一般使用核酸酶分解殘留DNA，普遍認為小于200 bp的DNA片段可有效降低致ai風險。宿主細胞蛋白殘留與免疫原性、炎癥或過敏性休克有關。盡管與非人類的生產原料相比（非人類細胞系如BHK21或昆蟲細胞，以及輔助病毒如HSV、腺病毒、桿狀病毒），人類細胞免疫原性比較弱。SAN HQ用量是Benzonase用量的...

一個美國客戶做了對照實驗，比較Benzonase和SAN HQ高鹽核酸酶純化病毒載體的效率。實驗設計如下，HEK293細胞轉染及培養(yǎng)后，分別取了150Million的293細胞進行裂解，分別在各自適宜的條件下（即SAN HQ組反應條件為500mM鹽濃度，而Benzonase組反應條件是150mM鹽濃度）加入等量的酶（0、2kU、3kU、4kU、5kU、6kU），37°孵育1hr，加入Picogreen染料后檢測DNA的殘留量。結果發(fā)現(xiàn)，SAN HQ高鹽核酸酶組用更少的酶得到了更好的去除效果（即2kU的SAN HQ消化結果明顯優(yōu)于6kU的Benzonase），且SAN HQ的高純化效率是非血清型...

宿主細胞DNA（HCD）殘留以染色質形式存在，其中有帶負電荷的DNA、帶正電荷及疏水區(qū)段的組蛋白，就像膠帶一樣能夠吸附很多物質，包括各種雜蛋白、色譜填料、目的病毒顆粒。非特異吸附雜蛋白，會影響蛋白雜質（如HCP）等的去除；吸附到色譜填料上，會降低色譜分離純化效率；吸附到目的病毒顆粒時，會影響目的產物的穩(wěn)定性，從而降低目的產物的得率。因此，從生產工藝層面來講，一定要去除HCD，從而能夠簡化工藝、提高目的產物的產量。SAN HQ高鹽核酸酶有助于減少了宿主細胞殘留DNA的污染，提高了基因藥物的安全性。江蘇上海倍篤生物高鹽核酸酶70921-150SAN HQ高鹽核酸酶發(fā)揮酶活性的條件比較廣。例如，該酶...

ArcticZymes Technologies提供獨特特性的鹽活性核酸酶（Salt Active Nucleases，SANs）系列產品，主要包含SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶。這兩款酶都是非特異核酸內切酶，跟Benzonase一樣能高效降解任何形式（雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀）的DNA和RNA；都來自于深海microbes，通過Pichia pastoris發(fā)酵生產得到。這兩款酶的區(qū)別在于發(fā)揮酶活的適宜鹽濃度不同，——M-SAN HQ中鹽核酸酶的適宜鹽濃度在175mM-250mM，而SAN HQ高鹽核酸酶的適宜鹽濃度在400mM-600mM。SAN HQ用量是Benzona...

SAN HQ高鹽核酸酶發(fā)揮酶活性的條件比較廣。例如，該酶適宜的鹽濃度（NaCl）范圍是400mM-600mM，能耐受高達1M NaCl濃度。適宜反應溫度為25℃-37℃，能耐受4℃-38℃。Mg2+濃度大于1mM即可，在5-20mM范圍即可表現(xiàn)更高活性。跟全能核酸酶類似，SAN HQ高鹽核酸酶也是一款堿性核酸酶，其適宜pH為8.0-8.9，能耐受6.8-9.5。為了達到更高酶活性，可以通過調節(jié)pH實現(xiàn)。鑒于SAN HQ的耐受性，可以用于很多應用，如大規(guī)模生產、蛋白純化、蛋白組學等。SAN HQ高鹽核酸酶是一種新型的、耐高鹽的工程化內切酶；SAN HQ TF高鹽核酸酶70921-150細胞基因藥...

上海倍篤生物科技有限公司（簡稱“倍篤生物”），由中國科學院及生物醫(yī)藥產業(yè)界人士，于2018年1月共同創(chuàng)立。公司代理多個品牌的儀器、試劑及耗材，遵守相關法規(guī)要求，如cGMP規(guī)范、ISO13485質量管理體系認證等，致力于為診斷領域如分子診斷及病原微生物檢測研發(fā)等，藥物研發(fā)領域如細胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細胞及外泌體研究等客戶提供合規(guī)、高質量物料及專業(yè)服務，以期與客戶共同協(xié)作，加快研發(fā)及生產進度，為客戶提供更多價值。SAN HQ高鹽核酸酶具有熱不穩(wěn)定的特性，在還原劑存在條件下，50℃、30min孵育即可失活；遼寧SAN HQ TF高鹽核酸酶70921-202目前基因藥物領域常用的病毒載體...

ArcticZymes Technologies產品大都來源于深海microbes中，具有一些共同的特性。1. 熱不穩(wěn)定性，使酶產品相對容易失活，簡化工作流程，方便自動化過程；2. 低溫活性，即在低溫或常溫下具有更高活性，縮短酶與底物的孵育時間，提高反應速度及效率；3. 耐鹽特性，是指大部分酶產品能耐受較高的鹽濃度，拓寬反應體系范圍選擇，在特殊體系的應用場景下具有更為出色的性能表現(xiàn)；4. 獨特特性，極限酶類產品能夠在非常規(guī)條件下進行酶促反應，讓一些反應從不可能變?yōu)榭赡?。ArcticZymes廠家管控整個供應鏈及生產流程，協(xié)助客戶進行文件審計及現(xiàn)場審計。福建500mM鹽濃度條件高鹽核酸酶7092...

在生物工藝中，核酸酶的主要作用是高效消化宿主細胞DNA（HCD），并將其分解成足夠小的片段，以便在下游純化過程中去除。雖然大多數(shù)核酸酶可以在生理鹽條件下高效地將裸DNA降解成微小片段，比如Benzonase和SANs都可以把dsDNA分解成小于8nt的寡核苷酸鏈，但實際生產中的核酸污染情況更加復雜。HCD通常以染色質形式存在，與細胞裂解碎片、病毒顆粒等結合在一起，影響核酸酶的識別及剪切。因此，HCD去除的關鍵在于——核酸酶如何在復雜的生產體系中識別并剪切HCD。SAN HQ高鹽核酸酶是一種新型的、耐高鹽的工程化內切酶；海南SAN HQ高鹽核酸酶70921一般來說，生物生產工藝用的核酸酶以Ben...