接下來，研究了CRC細(xì)胞來源的外泌體對巨噬細(xì)胞M2極化的影響。如Fig.3e所示，當(dāng)與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，標(biāo)記有DiO(綠色)的CRC細(xì)胞來源的外泌體被未染色的巨噬細(xì)胞內(nèi)化。相比于低表達(dá)miR-934的細(xì)胞的外泌體孵育的巨噬細(xì)胞或PBS孵育的細(xì)胞，M2標(biāo)記物(CD206,arginase-1,IL10和CD163)的表達(dá)在高表達(dá)miR-934的CRC細(xì)胞的外泌體孵育的巨噬細(xì)胞中***增加，而M1標(biāo)記物(iNOS和IL-1β)幾乎無差異（Fig.3f,g）。
為了確定CRC細(xì)胞來源的外泌體miR-934是否誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的M2極化，首先生成了miR-934mimics和anti-miR-934來過表達(dá)或抑制miR-934的表達(dá)。與對照組相比，轉(zhuǎn)染miR-934mimics的巨噬細(xì)胞M2標(biāo)記物(CD163、CD206、arginase-1和IL10)的表達(dá)明顯增加（Fig.3h,i）。此外，用anti-miR-934、miR-934mimics或其陰性對照載體轉(zhuǎn)染HCT-8和HT29細(xì)胞，提取其外泌體并添加到PMA處理的THP-1細(xì)胞中。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染anti-miR-934或miR-934mimics的CRC細(xì)胞的外泌體中M2標(biāo)記物(CD206、arginase-1、IL10和CD163)在PMA處理的THP-1細(xì)胞中表達(dá)明顯低于或高于載體對照組（Fig.3j,k）。綜上所述，證實(shí)CRC細(xì)胞來源的外泌體miR-934可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M2極化。 有肝轉(zhuǎn)移的PDAC患者外泌體CD44v6和C1QBP的表達(dá)明顯高于無肝轉(zhuǎn)移的PDAC患者。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)課題整體服務(wù)
褪黑素可減輕TBI引起的鐵死亡
為了確定褪黑素是否可以挽救TBI引起的鐵死亡，在相應(yīng)的高峰表達(dá)（例如1天和3天）進(jìn)行了與鐵死亡相關(guān)蛋白的蛋白質(zhì)印跡分析。發(fā)現(xiàn)褪黑素給藥在TBI后1天抑制了TBI誘導(dǎo)的xCT，Cox2，Tfr1，F(xiàn)pn和Nox2蛋白表達(dá)的上調(diào)。同樣，褪黑素***在TBI后3天阻止了Fth，F(xiàn)tl和4HNE蛋白的表達(dá)。用促鐵蛋白抑制劑liproxstatin-1（Lip-1）也獲得了相似的結(jié)果。此外，免疫組化染色顯示，與對照組相比在TBI后第7天，褪黑素和Lip-1的處理減少了神經(jīng)元中4HNE陽性細(xì)胞的數(shù)量，表明褪黑素對TBI誘導(dǎo)的脂質(zhì)具有神經(jīng)保護(hù)作用過氧化。褪黑素和Lip-1均抑制TBI誘導(dǎo)的皮質(zhì)GSH水平降低。褪黑素和Lip-1抑制TBI誘導(dǎo)3天后損傷皮層中MDA含量的上調(diào)。這些數(shù)據(jù)表明，TBI導(dǎo)致了與鐵死亡相關(guān)蛋白表達(dá)的時(shí)間變化，以及同側(cè)皮層中某些受推定的鐵死亡生物標(biāo)志物的變化，但是用褪黑素有效地挽救了TBI誘導(dǎo)的鐵死亡。 rip課題整包服務(wù)了解客戶的研究方向以及所能提供的樣本類型和樣本量確定研究思路。
導(dǎo)語：骨是一個(gè)動(dòng)態(tài)***，通過破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的協(xié)調(diào)產(chǎn)生自我修復(fù)潛力。衰老過程中骨的自我修復(fù)能力明顯受損。間充質(zhì)骨祖細(xì)胞（OPCs）向骨形成表面的遷移是成骨細(xì)胞生成的初始步驟，OPCs的遷移能力在衰老過程中是否受到損害，以及它如何促成衰老相關(guān)的骨形成減少仍不清楚。***，lncRNA粉墨登場，演繹著不一樣的精彩故事。
1.衰老過程中骨形成減少伴隨OPCs向骨形成表面遷移減少，lnc-PMIF表達(dá)升高
收集衰老小鼠模型的骨標(biāo)本，分析動(dòng)態(tài)骨組織形態(tài)，發(fā)現(xiàn)老年小鼠的礦化沉積率(MAR)和骨形成率(BFR/BS)均***降低，表明衰老期間小鼠的骨形成減少。從小鼠中分離出BMSCs，RNA-Seq分析發(fā)現(xiàn)老年BMSCs中遷移相關(guān)基因均下調(diào)。老年和年輕小鼠BMSCs成骨誘導(dǎo)7d后ALP活性和成骨誘導(dǎo)14d后鈣礦物質(zhì)沉積相當(dāng)，表明BMSCs的成骨潛能在衰老過程中沒有改變。
關(guān)聯(lián)研究已將血液來源的microRNA(miRNA)的改變與結(jié)直腸*(CRC)聯(lián)系起來。miRNA譜可能在CRC進(jìn)展過程中多樣化，并在血液中反映CRC進(jìn)展水平。但是，尚無研究評估不同CRC階段血液中miRNA的變化。本研究對來自不同階段的健康供體、結(jié)直腸腺瘤、結(jié)直腸憩室炎和CRC患者（UICCstagesI/II,III,andIV）的80份血液樣本中的2,549種miRNA的譜進(jìn)行了基于微陣列的比較。接下來通過RT-PCR進(jìn)行確認(rèn)，并對另外36份血液樣本中miRNA進(jìn)行驗(yàn)證。與健康對照相比，有179個(gè)CRC相關(guān)miRNA的豐度差異。只有三個(gè)（miR-1225-5p、miR-1207-5p和miR-4459）在所有CRC階段表現(xiàn)出增加的水平。對3個(gè)miRNA進(jìn)行通路分析，發(fā)現(xiàn)了miRNAs以各種方式對幾種**相關(guān)通路起作用。這項(xiàng)研究為改進(jìn)CRC篩查的生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)提供了線索，是***項(xiàng)提供CRC血液表達(dá)譜的研究，******評估了不同CRC不同階段血液中miRNA的變化。這也為其他疾病biomarker的研究提供了新的思路。Pex衍生的CD44v6/C1QBP復(fù)合物介導(dǎo)了Pex對肝纖維化和PDAC肝轉(zhuǎn)移的積極作用。
四、Multimodal分析突出了肥大的上行肢體的細(xì)胞異質(zhì)性
為了確定我們是否能夠檢測出具有可變claudin表達(dá)模式的細(xì)胞亞群，在snRNA-seq數(shù)據(jù)集的umap圖上劃分三個(gè)亞種群(TAL1,TAL2和ATL)。ATL，上升細(xì)肢。顯示了TAL各亞群體中富集基因的基因表達(dá)模式。一組細(xì)胞(SLC12A1+UMOD+)表達(dá)粗升肢標(biāo)記(CLDN16、KCNJ10和PTH1R):TAL1，另一組細(xì)胞表達(dá)另一組TAL特異性標(biāo)記，如CLDN10:TAL2(圖4b)。第三組細(xì)胞根據(jù)之前發(fā)表的標(biāo)記的表達(dá)被確定為髓袢升支粗段(ATL)。我們使用免疫組化方法驗(yàn)證PTH1R和KCNJ10在UMOD+SLC12A1+細(xì)胞亞群中表達(dá)(圖4c)。在snATAC-seq數(shù)據(jù)集的umap圖上進(jìn)行TAL的亞聚類，劃分三個(gè)亞種群(TAL1、TAL2和ATL)(圖4d)。點(diǎn)圖顯示每個(gè)TAL亞種群中富集的基因的活性模式(圖4e)。斑點(diǎn)的直徑對應(yīng)于檢測到的基因活性的細(xì)胞比例，斑點(diǎn)的密度對應(yīng)于相對于所有細(xì)胞類型的平均基因活性。Umap顯示CLDN10、CLDN16、S100A2或UMOD(左)的基因活性。TAL1和TAL2之間的chromVAR差異***轉(zhuǎn)錄因子基序(圖4f)。使用SeuratFindMarkers功能來識別區(qū)分厚升肢細(xì)胞群的DAR，并使用SeuratFindMotifs功能對這些DAR進(jìn)行轉(zhuǎn)錄因子motif富集(圖4g)。 IGF-1信號在Pex誘導(dǎo)的肝纖維化中起重要作用。M6a甲基化課題整包服務(wù)
zVAD預(yù)處理也略微增加了IR后PTEN-398A細(xì)胞中未解決的DNA損傷灶的數(shù)量。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)課題整體服務(wù)
質(zhì)膜塑造并保護(hù)真核細(xì)胞免受周圍環(huán)境的影響，對細(xì)胞生命至關(guān)重要。盡管重新密封受損膜的初始修復(fù)機(jī)制已經(jīng)很好地建立，但關(guān)于細(xì)胞如何在重建受損膜后恢復(fù)體內(nèi)平衡知之甚少。今年7月發(fā)表于《SCIENCE ADVANCES》的一篇研究表明，細(xì)胞通過***與巨胞飲作用相關(guān)的蛋白質(zhì)來響應(yīng)質(zhì)膜損傷，特別是在受損的膜上。在膜重新密封之后，細(xì)胞形成源自修復(fù)部位的、LC3B蛋白陽性的胞吞小體。此過程**于 ULK1、ATG13 和 WIPI2，但依賴于 ATG7、p62 和 Rubicon。內(nèi)化的胞吞小體在細(xì)胞質(zhì)中收縮，可能是通過滲透排出，并**終與溶酶體融合。這是一種與非經(jīng)典自噬相結(jié)合的巨胞飲作用，研究者將其稱為 LC3 相關(guān)巨胞飲作用 (LAM)，其功能是從質(zhì)膜上去除受損物質(zhì)并在損傷時(shí)恢復(fù)膜的完整性。接下來我們來看一下具體研究方法及結(jié)果：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)課題整體服務(wù)
公司特色是以各式高通量二代測序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺開放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計(jì)、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的開展，設(shè)計(jì)的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)