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測(cè)序技術(shù):在病毒的鑒定及診斷中,通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)和RT-PCR方法的聯(lián)合使用,可以實(shí)現(xiàn)優(yōu)勢(shì)互補(bǔ),提高陽(yáng)性檢出率。更為重要的是,利用高通量測(cè)序技術(shù)還可以對(duì)病毒序列進(jìn)行組裝,獲得病毒全長(zhǎng)基因組信息,為監(jiān)測(cè)病毒變異、探究致病機(jī)理提供研究基礎(chǔ)。本次報(bào)告將圍繞高通量測(cè)序技術(shù)在檢測(cè)中的方法和策略展開(kāi)分享。高通量測(cè)序技術(shù)的飛速發(fā)展使其在病毒學(xué)研究領(lǐng)域得到了越來(lái)越普遍的應(yīng)用。無(wú)論是突發(fā)病情的應(yīng)急處理、新病毒的發(fā)現(xiàn),還是較大規(guī)模的分子流行病調(diào)查,高通量測(cè)序技術(shù)都比一代測(cè)序技術(shù)有著巨大的優(yōu)勢(shì)。SFTS病毒(SFTSvirus,SFTSV)是2009年在中國(guó)新發(fā)現(xiàn)的一種布尼亞科白蛉病毒屬的蜱傳病毒,為新發(fā)傳染病發(fā)熱伴血小板減少綜合征(Severefeverwiththrombocytopeniasyndrome,SFTS)致病病因,現(xiàn)在在中國(guó)至少20個(gè)省流行。想要通過(guò)高通量測(cè)序獲得病毒全序列,需要經(jīng)歷:核酸純化-文庫(kù)構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這三大基本流程。山東病毒全基因組測(cè)序突變分析診斷
病毒全基因組測(cè)序在政策促進(jìn)下,未來(lái)3—5年內(nèi),我國(guó)將在醫(yī)藥、保養(yǎng)短缺地區(qū)建設(shè)一批高水平臨床醫(yī)治中心、高層次的人才培養(yǎng)基地和高水平的科研創(chuàng)新與轉(zhuǎn)化平臺(tái),培育一批品牌優(yōu)勢(shì)明顯、跨區(qū)域提供高水平服務(wù)的集團(tuán)。根據(jù)病毒測(cè)序,病毒全基因組測(cè)序,病毒宏基因組測(cè)序,未知病原鑒定相關(guān)領(lǐng)域極新技術(shù)發(fā)展趨勢(shì),《2019年本》在鼓勵(lì)類條目中新增了技術(shù)開(kāi)發(fā)和應(yīng)用的有關(guān)內(nèi)容。例如,在化學(xué)原料藥領(lǐng)域增加了“連續(xù)反應(yīng)”等技術(shù),在技術(shù)領(lǐng)域增加了“基因醫(yī)治”和“抗體偶聯(lián)”等技術(shù),在藥用包裝材料領(lǐng)域增加了“中性硼硅藥用玻璃”等材料與技術(shù)的開(kāi)發(fā)應(yīng)用,在醫(yī)藥領(lǐng)域增加了“人工智能輔助醫(yī)藥設(shè)備”等新技術(shù)內(nèi)容。DNA二代測(cè)序進(jìn)化分析排行在探普生物進(jìn)行病毒基因組測(cè)序是比較簡(jiǎn)單的。
第二代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展:第二代測(cè)序技術(shù)(nextgene-rationsequencing,NGS)發(fā)展迅猛,與Sanger測(cè)序技術(shù)相比,NGS是一種能一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)的DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定的高通量的測(cè)序技術(shù),這種高通量測(cè)序使得對(duì)一個(gè)物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進(jìn)行細(xì)致全貌地分析成為可能,因此又被稱為深度測(cè)序(deepsequencing).相比傳統(tǒng)的個(gè)體基因組測(cè)序,NGS使得測(cè)序價(jià)格日益廉價(jià),并且在生物信息學(xué)軟件的輔助下,可以將大量不同基因片段的信息連接起來(lái)進(jìn)行基因組組裝,完成生物的基因組測(cè)序,這種新的測(cè)序技術(shù)革新了植物病毒的診斷方法,對(duì)于病毒的流行病學(xué)和生態(tài)學(xué)研究起到了非常重要的推動(dòng)作用。
能實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序的技術(shù)手段:早期在高通量測(cè)序技術(shù)普及之前,對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序是通過(guò)非特異性擴(kuò)增+克隆結(jié)合sanger測(cè)序來(lái)完成的。當(dāng)物種有了參考的序列之后,可以通過(guò)特異性擴(kuò)增+sanger測(cè)序獲得全基因組序列。Sanger測(cè)序準(zhǔn)確度高,讀長(zhǎng)很長(zhǎng),但與此同時(shí),擴(kuò)增和克隆工作費(fèi)時(shí)費(fèi)力,由于流程繁瑣,加上快速變異導(dǎo)致引物無(wú)法通用,該方法對(duì)于大量基因組的測(cè)序工作而言,可操作性不強(qiáng),這對(duì)于研究者一直是一個(gè)困擾。高通量測(cè)序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測(cè)序和分析,減少了工作量,增加了成功率。探普生物進(jìn)行了大量有針對(duì)性的研發(fā)和測(cè)試,開(kāi)發(fā)了全套的實(shí)驗(yàn)和分析流程用于對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序,該流程自運(yùn)行以來(lái)廣受研究者們好評(píng)。深度測(cè)序數(shù)據(jù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域數(shù)量增加快、應(yīng)用廣的數(shù)據(jù)。
病毒基因組測(cè)序的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)是:測(cè)序的完成程度,決定著基因組的下游應(yīng)用,包括設(shè)計(jì)診斷產(chǎn)品、反向遺傳系統(tǒng)以及開(kāi)發(fā)調(diào)整對(duì)策等?;蚪M是生物體內(nèi)的遺傳物質(zhì),以DNA或RNA的形式編碼。病毒基因組包括基因和一些非編碼的DNA或RNA序列,含有病毒復(fù)制和傳播所必需的信息。因此,確定這些序列可以獲得寶貴的信息,可以應(yīng)用于各種醫(yī)學(xué)和科研領(lǐng)域。高通量測(cè)序技術(shù)飛速發(fā)展,現(xiàn)在幾乎所有的病毒研究方向都涉及了測(cè)序,包括分子流行病學(xué)、藥物和疫苗開(kāi)發(fā)、病毒的監(jiān)控與診斷等等。新一代測(cè)序中基因從頭測(cè)序和重測(cè)序有什么區(qū)別?重慶深度測(cè)序分析檢測(cè)
探普生物病毒基因組測(cè)序的流程有:與銷售人員溝通項(xiàng)目需求和樣本情況。山東病毒全基因組測(cè)序突變分析診斷
需要對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序的應(yīng)用場(chǎng)景:在探普生物長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)行過(guò)程中,我們接觸到的對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序項(xiàng)目有比較豐富的應(yīng)用場(chǎng)景。先,從事基因進(jìn)化/疫苗/藥品/抗體研制方向的研究的研究者一定會(huì)用到測(cè)序。這種場(chǎng)景一般是用密集的sanger測(cè)序監(jiān)測(cè)某幾個(gè)關(guān)鍵基因,搭載一定頻率的全基因組測(cè)序。這樣的組合省時(shí)省力省經(jīng)費(fèi),同時(shí)能達(dá)到研究目的。此外,有的單位需要對(duì)傳染病的病原進(jìn)行流行病學(xué)監(jiān)測(cè)和研究,如疾控/疫控中心、醫(yī)院的傳染病科室以及一些高校和研究所的相應(yīng)課題組,可能需要對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序以后,結(jié)合其他上下游的研究數(shù)據(jù),達(dá)到研究或者監(jiān)測(cè)疫病的目的。山東病毒全基因組測(cè)序突變分析診斷