注意事項1、細胞密度：MTT要檢測的只是細胞的增殖能力，所以不用保證孔內(nèi)細胞鋪板一定要均勻，只要保證孔與孔之間的細胞數(shù)量大致相同就可，也因此細胞重懸很重要。每孔加入之前，都需要吹打混勻細胞，但即便如此也很難保證每個孔的細胞數(shù)量大致一致。所以我們設置了6組實驗組，以便計算結(jié)果時可以有所取舍。2、對于MTT而言，預實驗很重要。預實驗要摸清楚兩點：a)細胞該如何稀釋；b)***濃度。網(wǎng)上很多人建議將細胞數(shù)稀釋到某個數(shù)值才是**合適的，但我認為只要保證每個孔內(nèi)的細胞數(shù)在70%左右，且各個孔內(nèi)細胞數(shù)量大致相同就可，不需要強求一定要達到某個數(shù)值，現(xiàn)實中，這一步需要多次摸索。換液的意思是將cck8加在培養(yǎng)基中以換液的形式加在孔板中避免氣泡產(chǎn)生。北京cck8設計
1、種板數(shù)：這個要查文獻，看你所用細胞別人有無做過，把范圍大致找出。記住還要參考說明書，這個很重要。然后稀釋一系列濃度種板。首先你要觀察多長時間細胞可貼壁完全，一般貼壁生長24小時。然后還有在你的實驗時間內(nèi)，不同細胞數(shù)下孔內(nèi)生長情況。比如我擬定考察4天的時間，那么在4天內(nèi)，細胞是剛好鋪滿還是堆積生長？因為每塊板都會設置對照孔，也就是含有細胞的培養(yǎng)基+CCK8，這個數(shù)值是板上的比較大數(shù)值，CCK8試驗比較好OD值在1.0附近，所以這個比較大數(shù)值比較好能控制在1.0左右。我的實驗經(jīng)驗是不要讓細胞長滿，一旦長滿了很難去判斷是否堆積生長了，對***能否順利進入細胞有影響此為其一，其二生長不均勻易導致孔間OD值數(shù)據(jù)偏差大，而且OD值也很大。北京cck8設計生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比.
讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻，酶標儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度。
***率（％）= [（對照孔吸光度-實驗孔吸光度）/（對照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50
注意事項
CCK8法檢測細胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應，如果實驗處理條件中存在還原劑的影響，應事先去除。如果實驗條件中存在還原物質(zhì)，需單獨測定還原物質(zhì)的空白吸光度。如果還原物質(zhì)的吸光度很小，可以忽略不計；但如果吸光度很大，則需要去除培養(yǎng)基，再用培養(yǎng)基洗滌細胞3次，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進行檢測。
cck8試劑加入后孵育時間，隨著時間的增加，OD值就會增大。總之原則就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。
再說一下關(guān)于種板設置問題。眾所周知周圍一圈孔因為邊緣效應都是不用來做實驗的。一般每組樣品我會設置6個復孔，得到的OD值去掉**大值與**小值，其余取平均值。我用的是排***，會省很多力氣，但是也會增大組內(nèi)誤差。這個只有通過校正移液***和選用**適***頭了。
能力有限，表達不清的大家湊合著看看吧。有疑問的歡迎大家留言討論，我們的目標是共同進步，哈哈。 水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞.
培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發(fā)生反應，產(chǎn)生實驗誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實驗均要設定空白對照。另外，血清不影響測定。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時，多加了這個***劑的濃度，該方法已被***用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗*****篩選以及藥敏試驗等。北京cck8設計
主要是重復性優(yōu)于MTT；北京cck8設計
3、24小時后，吸出培養(yǎng)基，對照組和空白組每孔各加入100ul無血清培養(yǎng)基，實驗組每孔加入100ul基礎培養(yǎng)基配制的***，繼續(xù)作用12或24小時；4、***作用完畢后，每孔加入50ulMTT,繼續(xù)作用4小時；5、棄掉每孔中的MTT，每孔加入150ul的DMSO或異丙醇。然后震蕩10分鐘，使孔底的紫色結(jié)晶充分溶解；6、在酶聯(lián)免疫機器上測定吸光度，波長為550nm或490nm。7、細胞存活率=（實驗組吸光度值-空白組吸光度值）/(對照組吸光度值-空白組吸光度值)***。北京cck8設計
上海儒安生物科技有限公司屬于醫(yī)藥健康的高新企業(yè)，技術(shù)力量雄厚。上海儒安生物科技是一家有限責任公司企業(yè)，一直“以人為本，服務于社會”的經(jīng)營理念;“誠守信譽，持續(xù)發(fā)展”的質(zhì)量方針。公司擁有專業(yè)的技術(shù)團隊，具有細胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液，cck8細胞增殖，內(nèi)參抗體等多項業(yè)務。上海儒安生物科技順應時代發(fā)展和市場需求，通過**技術(shù)，力圖保證高規(guī)格高質(zhì)量的細胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液，cck8細胞增殖，內(nèi)參抗體。