轉(zhuǎn)染試劑配方

基于磷酸鈣成分的轉(zhuǎn)染試劑，其主要作用原理是與DNA通過沉淀反應(yīng)形成磷酸鈣-DNA復(fù)合物，粘附到細(xì)胞膜表面，借助內(nèi)吞作用進入細(xì)胞質(zhì)。pH值，鈣離子濃度，DNA濃度，沉淀時間，細(xì)胞孵育時間乃至各組分加入順序都可能對結(jié)果產(chǎn)生影響，因此實驗條件摸索和優(yōu)化時間較長，且重復(fù)性不佳?；谥|(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑包括中性脂質(zhì)體和陽離子脂質(zhì)體兩種。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)。目前應(yīng)用比較***的是帶正電的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負(fù)電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物，從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞。此方法操作簡單，重復(fù)性好，在體外轉(zhuǎn)染中有很高的效率，但具有一定的細(xì)胞毒性，可能會干擾細(xì)胞的代謝。且活性受血清影響，需要去除血清。各種轉(zhuǎn)染試劑成分分析.轉(zhuǎn)染試劑配方

轉(zhuǎn)染是將外源核酸導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程，是細(xì)胞和分子生物學(xué)研究的重要工具，也是大部分的生物和分子生物領(lǐng)域的科研黨們繞不開的話題。然而常常聽到的抱怨是"轉(zhuǎn)染效率太低""轉(zhuǎn)染完細(xì)胞全漂了""轉(zhuǎn)染后忘記給細(xì)胞換液了"，真所謂辛辛苦苦實驗N多回，一夜回到解放前……眾所周知，影響轉(zhuǎn)染成功的因素非常多，包括細(xì)胞質(zhì)量、核酸質(zhì)量、微生物污染、轉(zhuǎn)染試劑等。各種細(xì)胞使用的轉(zhuǎn)染條件都可能不同，現(xiàn)實中也并沒有一種放之四海而皆準(zhǔn)的方案。上海動物轉(zhuǎn)染試劑供應(yīng)商.0試劑及RNAi復(fù)合物非常容易獲得：只需簡單地混合，并進行孵育（30min）、稀釋、及注射即可。

圖2.采用LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞時，實現(xiàn)了比較好的基因***效果和比較低的細(xì)胞毒性。試驗采用的LipofectamineRNAiMAX試劑劑量范圍為0.1μL-1.0μL之間，在維持優(yōu)良的細(xì)胞活力的同時，實現(xiàn)了p53基因表達水平的有效敲低.功能多樣簡便的實驗方案，易于針對***的細(xì)胞系進行優(yōu)化Invivofectamine?3.0Reagent突破性的體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑Invivofectamine3.0試劑是一種突破性的體內(nèi)RNAi輸送試劑，可大幅改善實驗性能，使用微克級的siRNA即可達到高達85%的敲低效果。

用LipoFectMax?轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，左圖轉(zhuǎn)染GFP cDNA，右圖共轉(zhuǎn)染GFP CDNA和GFP靶向siRNA。轉(zhuǎn)染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默。

4適用于神經(jīng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染圖4.  用LipoFectMax? 和LipoFectamine®2000分別對小鼠神經(jīng)元細(xì)胞進行轉(zhuǎn)染綠色熒光白蛋白（GFP），轉(zhuǎn)染24小時后觀察轉(zhuǎn)染效果，LipoFectMax? 轉(zhuǎn)染效率（左圖）比LipoFectamine®2000（右圖）高5倍。

LipoFectMax? 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑操作流程

細(xì)胞毒性低圖2.LipoFectMax? ，LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對A549細(xì)胞進行轉(zhuǎn)染操作，通過計算轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞存活率比較細(xì)胞毒性。 mRNA細(xì)胞&***轉(zhuǎn)染試劑來助力.

用 LipoD293? 體外 DNA 轉(zhuǎn)染試劑（Ver. II）（上圖）和受歡迎的品牌產(chǎn)品 Invitrogen 公司的 293fectin?（下圖）轉(zhuǎn)染 pEGFP-C1 質(zhì)粒到 HEK293 細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染 24 小時后，細(xì)胞的尼康 Eclipse 熒光顯微鏡 DIC 成像圖（左側(cè)）和熒光成像圖（右側(cè)）。

對懸浮 HEK293F 產(chǎn)生蛋白質(zhì)效率的比較/

30 毫升的 293F 細(xì)胞分別使用 LipoD293?試劑、293fectin、Xfect 和 Fugene 6 等轉(zhuǎn)染試劑按照生產(chǎn)商的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染步驟將 pEGFP-6xHis 質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞表達，用量為 LipoD293? 試劑，20 微克，所有其他三種轉(zhuǎn)染試劑均使用 30 微克質(zhì)粒 DNA。 連續(xù)細(xì)胞系具有無限增殖的潛能，通常要比原代或有限細(xì)胞更易處理.上海懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

將20μL轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入孔中的細(xì)胞懸液中，前后移動培養(yǎng)皿，混合均勻；轉(zhuǎn)染試劑配方

原代細(xì)胞直接分離自組織并在適當(dāng)條件下增殖。因此，它們的形態(tài)學(xué)和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似。但相對于連續(xù)細(xì)胞系，它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。在經(jīng)過***次傳代培養(yǎng)之后，原代培養(yǎng)物變成了一種細(xì)胞系。源自于原代培養(yǎng)物的細(xì)胞系具有有限的壽命（即它們是有限細(xì)胞系），且隨著傳代的進行，具有比較高的生長能力的細(xì)胞逐漸占據(jù)支配地位，從而造成了細(xì)胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。相對來說，這一類細(xì)胞要比原代細(xì)胞使用起來更為方便，尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代。 轉(zhuǎn)染試劑配方

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