轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序有什么樣的樣品要求？（1）樣品純度要求：OD值應(yīng)在1.8至2.2之間；電泳檢測(cè)28S:18S至少大于1.8。（2）樣品濃度：totalRNA濃度不低于400ng/μg。（3）totalRNA樣品請(qǐng)置于-20℃保存；請(qǐng)?zhí)峁﹖otalRNA樣品具體濃度、體積、制備時(shí)間、溶劑名稱及物種來源。請(qǐng)同時(shí)附上QC數(shù)據(jù)，包括電泳膠圖、分光光度或Nanodrop儀器檢測(cè)數(shù)據(jù)。（4）樣品請(qǐng)置于1.5ml管中，管上注明樣品名稱、濃度以及制備時(shí)間，管口使用Parafilm封口。建議使用干冰運(yùn)輸，并且盡量選用較快的郵遞方式，以降低運(yùn)輸過程中樣品降解的可能性。轉(zhuǎn)錄組學(xué)靈敏度高，可以檢測(cè)細(xì)胞中少至幾個(gè)拷貝的稀有轉(zhuǎn)錄本。北京circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析研究
轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序結(jié)果的影響因素？RNA的降解嚴(yán)重影響測(cè)序的質(zhì)量，RNA降解后，加入poly-A后無法捕獲純化mRNA，因此，隨機(jī)引物反轉(zhuǎn)錄無法得到全部的cDNA，導(dǎo)致測(cè)序結(jié)果出現(xiàn)明顯的3‘-和5’-偏向。文庫中的poly-A多聚物的存在會(huì)對(duì)測(cè)序信號(hào)產(chǎn)生干擾，影響測(cè)序結(jié)果的準(zhǔn)確性；同時(shí)由于轉(zhuǎn)錄組中轉(zhuǎn)錄本的豐度不一致，實(shí)驗(yàn)前需要對(duì)樣本進(jìn)行均一化處理，否則高豐度的表達(dá)基因會(huì)掩蓋低豐度表達(dá)基因，導(dǎo)致尋找新基因失敗或者是獲得大量無意義的重復(fù)序列。廣州全轉(zhuǎn)錄學(xué)組檢測(cè)多少錢轉(zhuǎn)錄組學(xué)是一門在整體水平上研究細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科。
宏轉(zhuǎn)錄學(xué)組的概念：宏轉(zhuǎn)錄組是特定時(shí)期、環(huán)境樣本、組織樣本中所有的微生物的RNA（轉(zhuǎn)錄本）的匯合。通過對(duì)這些轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行大規(guī)模高通量測(cè)序，可以直接獲得環(huán)境中可培養(yǎng)和不可培養(yǎng)的微生物轉(zhuǎn)錄組信息。這種技術(shù)不只具有宏基因組技術(shù)的全部?jī)?yōu)點(diǎn)，可以檢測(cè)環(huán)境中的活性微生物、活性轉(zhuǎn)錄本以及活性功能進(jìn)行研究，還可以比較不同環(huán)境下的差異表達(dá)基因和差異功能途徑，揭示微生物在不同環(huán)境壓力下的適應(yīng)機(jī)制，探索環(huán)境與微生物之間的互作機(jī)理。
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)試步驟：第1步就是把單個(gè)細(xì)胞分選出來。分選的方式也比較多，物理切割，酶消化，F(xiàn)ACS分選等。假如已經(jīng)分到了一個(gè)單細(xì)胞，跟常規(guī)的轉(zhuǎn)錄組步驟上是一樣的。下一步就是把單細(xì)胞里的RNA提取出來去建庫測(cè)序。但是一個(gè)細(xì)胞里的RNA含量是比較少的，難建庫成功。這個(gè)里面“量”的概念很有意思。比如說單細(xì)胞量少，需要特殊處理。因?yàn)閱渭?xì)胞里面RNA的量少，所以說整個(gè)富集的過程中會(huì)出現(xiàn)一部分基因在一個(gè)細(xì)胞里能檢測(cè)到，在另外一個(gè)細(xì)胞里面檢測(cè)不到，而每個(gè)細(xì)胞里面的檢測(cè)存在一個(gè)隨機(jī)性，同時(shí)單細(xì)胞測(cè)序深度比較低，所以說分析時(shí)相比于普通轉(zhuǎn)錄組有一些是需要特別注意，但整體的分析思路是類似的。相對(duì)于傳統(tǒng)的芯片雜交平臺(tái)，轉(zhuǎn)錄學(xué)組測(cè)序無需預(yù)先針對(duì)已知序列設(shè)計(jì)探針。
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)：?jiǎn)渭?xì)胞轉(zhuǎn)錄組目前主要有三種方法：SMART擴(kuò)增技術(shù)、10×genomics技術(shù)及Andeplete技術(shù)。SMART擴(kuò)增技術(shù)比較關(guān)鍵的技術(shù)，就是設(shè)計(jì)了2個(gè)特殊的引物。再配合用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。特殊引物1由中間PolyT序列加上一段通用序列及3’末端兩個(gè)簡(jiǎn)并堿基構(gòu)成，但在PolyT的3’端倒數(shù)第二個(gè)堿基是A、C、G而非T的簡(jiǎn)并堿基，而倒數(shù)第1個(gè)為簡(jiǎn)并堿基，這樣做的好處是讓它正好結(jié)合在mRNA的3’端連到Poly(A)尾巴的這個(gè)連接處，而不會(huì)結(jié)合到mRNA的別的地方。這樣就保證了逆轉(zhuǎn)錄的起始位置正好是mRNA的3’端的序列終止位置。MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶，這個(gè)酶有個(gè)特點(diǎn)，就是它在轉(zhuǎn)錄到mRNA的5’端末端的時(shí)侯，會(huì)在新合成的cDNA的3’末端，多加出幾個(gè)C堿基來。轉(zhuǎn)錄學(xué)組測(cè)序是目前深入研究轉(zhuǎn)錄組復(fù)雜性的強(qiáng)大工具。貴陽circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)
轉(zhuǎn)錄組學(xué)無需預(yù)先設(shè)計(jì)特異性探針。北京circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析研究
RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)優(yōu)勢(shì)有：1、可以直接測(cè)定每個(gè)轉(zhuǎn)錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準(zhǔn)確度;2、靈敏度高，可以檢測(cè)細(xì)胞中少至幾個(gè)拷貝的稀有轉(zhuǎn)錄本;3、可以對(duì)任意物種進(jìn)行全基因組分析，能夠檢測(cè)未知基因，發(fā)現(xiàn)新的轉(zhuǎn)錄本，并準(zhǔn)確地識(shí)別可變剪切位點(diǎn)及cSNP，UTR區(qū)域;4、檢測(cè)范圍廣，能夠同時(shí)鑒定和定量稀有轉(zhuǎn)錄本和正常轉(zhuǎn)錄本。RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)是需要生物學(xué)重復(fù)的，至少需要兩次生物學(xué)重復(fù)，3次以上的生物學(xué)重復(fù)更好。以3個(gè)重復(fù)為例，加上對(duì)照的三個(gè)生物學(xué)重復(fù)，一次RNA-seq需要6個(gè)樣本。北京circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析研究
上海拜譜生物科技有限公司是一家從事生物科技、醫(yī)療科技、化工科技和檢測(cè)科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)，技術(shù)轉(zhuǎn)讓，技術(shù)咨詢，技術(shù)服務(wù)，軟件開發(fā)，化工原料及產(chǎn)品（除危險(xiǎn)化學(xué)品，監(jiān)控化學(xué)品，煙花爆竹，民用物，易制毒化學(xué)品）、儀器儀表的銷售。。。....的公司，是一家集研發(fā)、設(shè)計(jì)、生產(chǎn)和銷售為一體的專業(yè)化公司。拜譜生物擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團(tuán)隊(duì)，以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供多組學(xué)服務(wù)，質(zhì)譜檢測(cè)，蛋白質(zhì)組學(xué)，代謝組學(xué)。拜譜生物致力于把技術(shù)上的創(chuàng)新展現(xiàn)成對(duì)用戶產(chǎn)品上的貼心，為用戶帶來良好體驗(yàn)。拜譜生物始終關(guān)注自身，在風(fēng)云變化的時(shí)代，對(duì)自身的建設(shè)毫不懈怠，高度的專注與執(zhí)著使拜譜生物在行業(yè)的從容而自信。