普通轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序適用于哪些情況？普通轉(zhuǎn)錄組測序主要適用于兩大類：一是不同的生長階段或者發(fā)育過程；二是不同的環(huán)境、藥物、病原菌等逆境脅迫處理。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序必須做生物學(xué)重復(fù)么？需要幾個重復(fù)？生物學(xué)重復(fù)是生物實驗所必須的，轉(zhuǎn)錄組測序也不例外，至少3次生物學(xué)重復(fù)。準備生物重復(fù)樣品時，通過對實驗的預(yù)先設(shè)計和控制，盡可能將與實驗處理無關(guān)的背景條件控制在同一水平，減少批次效應(yīng)對結(jié)果的影響。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序可以同時測到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么？我們通常所講的轉(zhuǎn)錄組測序只能測到mRNA。但是全轉(zhuǎn)錄組測序通過構(gòu)建兩個測序文庫（一是小RNA測序文庫、二是lncRNA測序文庫）是可以測到以上4種RNA的。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于基因點突變及多態(tài)性檢測。浙江SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)領(lǐng)域
轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序類型：1.根據(jù)RNA種類：可以分為mRNA測序，SmallRNA測序，LncRNA測序、CircRNA測序、全轉(zhuǎn)錄組測序等。2.根據(jù)物種特點：比如真核生物或者原核生物，是否有參考基因組，測序平臺的不同，分為真核有參和無參轉(zhuǎn)錄組測序，原核轉(zhuǎn)錄組測序，全長轉(zhuǎn)錄組測序等。3.根據(jù)相互關(guān)系：分為互作轉(zhuǎn)錄組，比較轉(zhuǎn)錄組等等；此外，基因組甲基化會影響到基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，也屬于轉(zhuǎn)錄調(diào)控測序范疇；還有用于研究轉(zhuǎn)錄因子與DNA的交互作用或組蛋白修飾在基因組上的分布的ChIP-Seq，研究RNA與蛋白互作關(guān)系的RIP-Seq，以及研究RNA甲基化的MeRIP-Seq等。武漢單細胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜分析轉(zhuǎn)錄組學(xué)可以直接測定每個轉(zhuǎn)錄本片段序列。
circRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)：是一類具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子，沒有5′帽子結(jié)構(gòu)和3′poly（A）結(jié)構(gòu)，主要位于細胞質(zhì)或儲存于外泌體中，不受RNA外切酶影響，表達更穩(wěn)定且不易降解，已被證明普遍存在于多種真核生物體內(nèi)[1]。大多數(shù)circRNA是由外顯子環(huán)化而成，也有部分circRNA是由內(nèi)含子環(huán)化而成的套索結(jié)構(gòu)。同時由于circRNA含有大量的miRNA應(yīng)答原件（MREs），能與AGO蛋白形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體（RISC）的催化關(guān)鍵，然后導(dǎo)致circRNA降解。根據(jù)來源，circRNA可大致分為四類：全外顯子型的circRNA，內(nèi)含子和外顯子組合的EIcircRNA，內(nèi)含子組成的套索型ciRNA，由病毒RNA基因組、tRNA、rRNA、snRNA等環(huán)化產(chǎn)生的circRNA。
轉(zhuǎn)錄組是干什么用的，和表達譜有什么區(qū)別？轉(zhuǎn)錄組，指細胞某一時期所有基因的轉(zhuǎn)錄水平。轉(zhuǎn)錄組學(xué)，是一門在整體水平上研究細胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科。簡而言之，轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達的情況。對RNA的分析。分析應(yīng)該是分幾個維度的DNA到RNA，RNA的剪切拼接，RNA的翻譯。表達譜有兩種，分別是基因表達譜和蛋白質(zhì)表達譜。基因表達譜是指細胞中所有基因表達的格局。通過比較分析基因表達譜，可從整體水平研究代謝機制，認識基因相互作用的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，發(fā)現(xiàn)重要基因。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于植物生長機制的發(fā)現(xiàn)及干預(yù)。
RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)的應(yīng)用：RNA-Seq即對轉(zhuǎn)錄組進行測序和分析。一般來說在研究所會委托公司測序得到數(shù)據(jù)自己進行后續(xù)的生信分析（質(zhì)控，mapping，差異基因表達分析，SNV分析等）。RNA-Seq有著巨大的應(yīng)用前景。在不同背景下比較mRNA水平同一物種，不同組織：研究基因在不同部分的表達情況。同一物種，同一組織：研究基因在不同處理下，不同條件下的表達變化。同一組織，不同物種：研究基因的進化關(guān)系。時間序列實驗：基因在不同時期的表達情況與發(fā)育的關(guān)系?；蚍诸悾赫业郊毎禺?，疾病相關(guān)，處理相關(guān)的基因表達模式，用于診斷疾病和預(yù)測等。基因網(wǎng)絡(luò)和通路：基因在細胞活動中的功能，基因間的相互作用。轉(zhuǎn)錄組學(xué)無需了解物種基因信息，能夠直接對任何物種進行轉(zhuǎn)錄組分析。武漢RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜鑒定
轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于表達差異的研究。浙江SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)領(lǐng)域
單細胞轉(zhuǎn)錄組關(guān)鍵步驟：單細胞的分離和捕獲：溫和分離，稀有細胞。轉(zhuǎn)錄本的捕獲和擴增：RNA測序需要0.1-1.0ugtotalRNA，捕獲效率10%（5-**NA測序需要1ngDNA，極限稀釋加移液分離單細胞；顯微操作分選單細胞；流式分選帶有表面Marker的單細胞；激光切割實體組織；微流控技術(shù)；磁珠捕獲，主要用于CTC。它的一個優(yōu)點是可以結(jié)合流式細胞熒光分選（FACS,fluorescentactivatedcellsorting）根據(jù)表面Marker分選細胞。因此特別適合分選細胞子集用于測序。它的另一個優(yōu)點是可以獲得細胞形態(tài)全覽圖，提供另外一個維度的信息，可用于鑒定微孔中是否有損傷的細胞或雙份細胞，主要缺點是通量低且每個細胞所需的工作量相當大。浙江SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)領(lǐng)域
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