湖北常規(guī)蛋白質組學質譜分析

來源: 發(fā)布時間:2022-03-06

蛋白質組學發(fā)展趨勢:1、基礎研究方面:近兩年來蛋白質組研究技術已被應用到各種生命科學領域,如細胞生物學、神經生物學等。在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍,涉及到各種重要的生物學現(xiàn)象,如信號轉導、細胞分化、蛋白質折疊等等。在未來的發(fā)展中,蛋白質組學的研究領域將更加普遍。2、應用研究方面:蛋白質組學將成為尋找疾病分子標記和藥物靶標比較有效的方法之一。在對早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質組技術也有十分誘人的前景,目前國際上許多大型藥物公司正投入大量的人力和物力進行蛋白質組學方面的應用性研究。蛋白質組學包括蛋白與蛋白相互作用等。湖北常規(guī)蛋白質組學質譜分析

蛋白質組學概念:蛋白質組學(英語:proteomics,又譯作蛋白質體學),是以蛋白質組為研究對象,研究細胞、組織或生物體蛋白質組成及其變化規(guī)律的科學。蛋白質組(Proteome)一詞,源于蛋白質(protein)與基因組(genome)兩個詞的組合,意指“一種基因組所表達的全套蛋白質”,即包括一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質。蛋白質組學本質上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質的特征,包括蛋白質的表達水平,翻譯后的修飾,蛋白與蛋白相互作用等,由此獲得蛋白質水平上的關于疾病發(fā)生,細胞代謝等過程的整體而全方面的認識。河南蛋白質定量組學主要技術蛋白質組學技術有電噴霧質譜。

蛋白質組學在醫(yī)療和健康方面有什么應用?基于質譜的蛋白質組學是目前比較主流的高通量蛋白質研究手段,當前在醫(yī)療健康方面的應用主要集中于基礎研究和轉化醫(yī)學。隨著質譜、系統(tǒng)生物學、生物信息學等相關學科的發(fā)展,我認為今后我們會更多地在現(xiàn)實生活中見到蛋白質組學相關的應用。如定量胰島素、鑒定血紅蛋白氨基酸突變(鐮刀形紅細胞癥)、糖化血紅蛋白比例測定等。從測試體量估計,應該遠小于1%的ELISA測試量。由于成本和通量等原因,蛋白質組學技術并不如ELISA適合大量的日常分析。但對于一些分析有問題的項目,采用基于質譜(或二維膠等手段)的蛋白質組學有獨特的技術優(yōu)勢。另外,蛋白質組學方法開發(fā)和驗證周期短,在中高級特殊應用(如極少使用的特殊蛋白指標臨床檢測、未知疾病研究和控制)中也有其獨特優(yōu)勢。

定量蛋白質組學分析:特點:(1)不同樣本標記之后混樣,統(tǒng)一處理上機,減少了分別上機造成的實驗誤差,并利用同位素標簽的豐度來檢測,定量更準確,重復性更好;(2)由于需要標記試劑標記,因此成本相對較高;(3)通量高,在一次實驗中比較多可同時比較8個樣品;(4)利用基于同一個參考樣品的辦法,可以進行多于8個樣品的定量比較;(5)iTRAQ的覆蓋度高、靈敏度高。Label-Free定量蛋白質組學分析:Label-Free定量,即非標記的定量蛋白質組學,不需要對比較樣本做特定標記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質譜響應信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化,通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時所產生的質譜數據。定量蛋白質組學是蛋白質組研究的重要內容。

常規(guī)蛋白質組學:Labelfree多肽組學:顧名思義,就是不使用任何標記方法,直接對肽段進行質譜鑒定和定性定量分析。實驗流程簡單,只需要對蛋白進行常規(guī)酶解和除鹽步驟即可上機。定量方式分為兩種:峰面積(Peakintensity)和峰計數(Spectralcount),常用的是峰面積。不過,由于質譜采集時只選取topN的母離子進行二級碎裂和MS2檢測,所以會丟失一些豐度較低的肽段信息,缺失值比較多。TMT/iTRAQ標記定量蛋白組學:TMT全稱是TandemMassTag,是經典化學標記試劑,普遍用于差異表達蛋白質組分析研究中。該技術采用6重、10重或16重同位素標簽,與肽段的氨基發(fā)生共價結合反應,可實現(xiàn)同時對6個/10個/16個不同樣品中蛋白質的定性和定量分析。(目前16標鹿明生物可提供技術服務)。蛋白質組的概念指由一個基因組,或一個細胞、組織表達的所有蛋白質。河南蛋白質定量組學主要技術

蛋白質組學本質上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質的特征。湖北常規(guī)蛋白質組學質譜分析

蛋白組學研究怎么做?PRM:平行反應監(jiān)測(ParallelReactionMonitoring)是一種基于高分辨、高精度質譜的離子監(jiān)視技術,能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,從而實現(xiàn)對目標蛋白質/肽段進行一定定量,因此也被稱之為基于液相色譜質譜聯(lián)用技術的WesternBlot(LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB)。PRM技術基于Q-Orbitrap為表示的高分辨、高精度質譜平臺,首先利用四級桿質量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在Collisioncell中對母離子進行碎裂,之后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。湖北常規(guī)蛋白質組學質譜分析

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