四川亞硝基化修飾蛋白質組學服務

來源: 發(fā)布時間:2022-01-30

蛋白質修飾位點分析:基于LC-MS/MS分析能夠精確測定蛋白質或多肽分子質量這一特性,從而檢測蛋白質或者多肽上位點發(fā)生何種修飾。可檢測修飾類型如下: 磷酸化、糖基化、乙酰化、泛素化、丙?;⒍□;?、丙二?;⑽於;?、琥珀?;?、單甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化:信號轉導、細胞周期、生長發(fā)育機理等;2、糖基化:蛋白質折疊、更新以及免疫應答等;3、乙酰化:基因表達調控、細胞凋亡、細胞代謝、蛋白質穩(wěn)定性以及神經(jīng)退行性的病變等;4、泛素化:細胞周期、細胞凋亡、轉錄調控、DNA修復以及信號轉導等;5、甲基化:染色質結構及轉錄調控等;6、丙酰化 / 丙二?;?/ 戊二酰化 / 琥珀?;褐饕嬖谟诰€粒體和細菌中,與代謝過程密切相關。在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質譜進行分析。四川亞硝基化修飾蛋白質組學服務

蛋白質乙?;揎椊M學技術:乙?;揎検求w內保守的可逆轉的蛋白修飾,對細胞核內轉錄調控因子的刺激有著重要的作用。此外,還存在的非組蛋白乙酰化修飾參與了代謝通路及代謝酶活性的調節(jié)。采用肽段預分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙酰化鑒定的影響,再結合免疫共沉淀通過抗體富集乙?;碾亩?,從而實現(xiàn)乙酰化的鑒定及定量。樣品要求:1、SDS-PAGE條帶:5個以上可見考染條帶。2、溶液(目標蛋白質):目標蛋白總量>50μg,目標蛋白濃度>80%。3、溶液(大規(guī)?;旌系鞍踪|):蛋白總量>1mg,蛋白濃度>1μg/μl。四川琥珀?;揎椀鞍踪|組學質譜鑒定蛋白質翻譯后修飾組學磷酸化修飾具有可逆的特性。

蛋白質翻譯后修飾組學:血漿蛋白糖基化修飾分析:蛋白質糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質上的過程,是一種常見的蛋白質翻譯后修飾。分泌的細胞外蛋白常被糖基化,糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白。血漿中的蛋白質包括維持機體正常生理狀態(tài)的蛋白質和機體分泌、滲漏、脫落的蛋白質,其中不乏存在一些糖基化蛋白質。而蛋白質糖基化修飾不只影響蛋白質的空間構象、生物活性、運輸和定位,而且在分子識別、細胞通信、信號轉導等特定生物過程中發(fā)揮著至關重要的作用。因此對血漿蛋白糖基化進行分析,有助于研究血漿蛋白的生理功能等。

蛋白質乙?;揎楄b定流程:1. 組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特異性乙?;贵w對乙酰化修飾肽段進行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS對富集的乙?;亩芜M行鑒定分析。5. 數(shù)據(jù)分析,并對鑒定的乙?;稽c的生物學功能進行解釋預測。隨著蛋白質組研究的發(fā)展,我們越來越深刻地意識到,對于生物體生命活動的管理和調控過程,密切相關的不只是單個蛋白質層面的修飾狀態(tài),更重要的是研究蛋白質組學水平研究在翻譯后修飾的動態(tài)變化。高質、高效的蛋白質翻譯后修飾富集技術和豐富的、準確的定量手段使得研究蛋白質水平的翻譯后修飾組學成為現(xiàn)實,借助這些組學研究手段能夠實現(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較,深入地揭示翻譯后修飾水平的波動與生物生命活動的密切聯(lián)系。質譜是蛋白質翻譯后修飾檢測的常用技術之一。

蛋白質磷酸化修飾組學:蛋白質的磷酸化修飾是生物體內重要的共價修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡單、靈活、可逆的特性,以及磷酸基團的供體ATP的易得性,使得磷酸化修飾被真核細胞所選擇接受成為一種比較普遍的調控手段。蛋白質的磷酸化和去磷酸化這一可逆過程,幾乎調節(jié)著包括細胞的增殖、發(fā)育、分化、細胞骨架調控、細胞凋亡、神經(jīng)活動、肌肉收縮、新陳代謝發(fā)生等生命活動的所有過程,并且可逆的蛋白質磷酸化是目前所知道的比較主要的信號轉導方式。目前已經(jīng)知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起,而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導致的后果。蛋白質乙?;揎?,顧名思義指的就是在蛋白質原有基礎上面嫁接上乙酰化基團。四川琥珀?;揎椀鞍踪|組學質譜鑒定

蛋白質翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質的功能。四川亞硝基化修飾蛋白質組學服務

翻譯后修飾蛋白組:翻譯后修飾蛋白組分析是指在組學水平上對存在翻譯后修飾的蛋白質進行分析。翻譯后修飾蛋白組是指細胞或組織等整體水平上的翻譯后修飾蛋白。蛋白質的翻譯后修飾(Post Translational Modifications, PTMs)是蛋白質在翻譯中或翻譯后經(jīng)歷的一個共價加工過程。蛋白翻譯后修飾通過在一個或多個氨基酸殘基上加修飾基團或通過蛋白質水解去基團而改變蛋白質的性質,調節(jié)蛋白質的功能。經(jīng)過翻譯后修飾的蛋白質稱為翻譯后修飾蛋白。目前,已知的蛋白質翻譯后修飾主要包括糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化、二硫鍵配對、甲基化和亞硝基化等等。四川亞硝基化修飾蛋白質組學服務

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