湖北細胞培養(yǎng)基廠家

在細胞培養(yǎng)實踐中，選擇合適的 DMEM 培養(yǎng)基至關重要。對于生長較快、粘附性低的細胞，如某些腫瘤細胞和雜交瘤細胞，高糖型 DMEM 培養(yǎng)基是理想之選，其高濃度葡萄糖能充分滿足這類細胞對能量的高需求，促進細胞快速生長。而對于一些原代細胞，因其對培養(yǎng)環(huán)境更為敏感，可能需要低糖型 DMEM 培養(yǎng)基，并根據(jù)細胞來源和特性添加特定的生長因子、營養(yǎng)補充劑等，定制專屬培養(yǎng)方案，為原代細胞提供**適宜的生長條件，提高原代細胞培養(yǎng)的成功率。RPMI-1640是改進型的McCoy ‘s 5A培養(yǎng)基，使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)。湖北細胞培養(yǎng)基廠家

    無血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分，才能幫助細胞貼壁生長，包括以下幾大類物質：1）促貼壁物質：一般為細胞外基質，如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子，對許多細胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化，這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質細胞、CHO細胞、成肌細胞等。2）促生長因子：針對不同細胞添加不同的生長因子。也是刺激細胞生長、維持細胞功能的重要物質，有些是許多細胞必不可少的，如胰島素。3）酶抑制劑：培養(yǎng)貼壁生長的細胞，需要用胰酶消化傳代，在無血清培養(yǎng)基中需含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達到保護細胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制劑。4）結合蛋白和轉運蛋白：常見如轉鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比較大，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護細胞免受機械損傷。許多旋轉式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。5）微量元素：硒是常見的。上海醫(yī)用細胞培養(yǎng)基源頭直供DMEM培養(yǎng)基**初設計葡萄糖含量為1000mg/L（低糖型），后來又發(fā)展出葡萄糖含量為4500mg/L（高糖型）。

    Alanyl-glutamine，Ala-Glu），又名丙氨酰谷氨酰胺、丙谷二肽，是一種高級細胞培養(yǎng)添加劑，可直接替代細胞培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺。L-谷氨酰胺（Glutamine）是細胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)素，但其在溶液中不穩(wěn)定，會自發(fā)降解生成氨和焦谷氨酸，其中氨對細胞有害；而L-丙氨酰-L-谷氨酰胺在水溶液中十分的穩(wěn)定，不會自發(fā)的降解。細胞利用其機制是：在細胞培養(yǎng)時，細胞會逐漸向培養(yǎng)液中釋放一種肽酶，將L-丙氨酰-L-谷氨酰水解成L-丙氨酸和L-谷氨酰胺，而后細胞會將這兩種水解產(chǎn)物吸收利用。細胞利用L-丙氨酰-L-谷氨酰的過程與流加培養(yǎng)策略相似，連續(xù)的將低濃度水平的L-谷氨酰胺加入到培養(yǎng)液中，從而提高了L-谷氨酰胺的利用率，且不會生成多余的氨，更利于細胞的生長。L-丙氨酰-L-谷氨?？梢源娴饶柕腖-谷氨酰胺，適用于所有的細胞，幾乎無需適應，并且可以延長細胞的培養(yǎng)時間，減少傳代次數(shù)，即節(jié)省了時間也節(jié)約了金錢。與添加L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細胞相比，活性降低得更慢。延滯期略微延長的原因是肽酶的釋放和二肽的消化需要一定的時間。NEAA（非必須氨基酸），是在MEM培養(yǎng)基的基礎上添加L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天（門）冬酰胺、L-天。

    Ham’sF-12營養(yǎng)混合物（Ham’sF-12NutrientMixture）Ham’sF-12營養(yǎng)混合物（Ham’sF-12NutrientMixture）是由Ham在1969年以Ham’sF-10營養(yǎng)混合物為基礎設計而成的，初用于CHO細胞的無血清培養(yǎng)。Ham’sF-12常作為無血清培養(yǎng)的基礎培養(yǎng)液，在低血清含量下時，特別適合單細胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，添加血清后也廣泛應用于細胞和原代細胞的培養(yǎng)，如大鼠肝細胞、大鼠前列腺上皮細胞、軟骨細胞、大鼠成肌細胞、雞胚胎細胞等。此外，Ham’sF-12與DMEM等體積混合后，得到的DMEM/F12培養(yǎng)基營養(yǎng)更為豐富，使用更為較廣。Ham’sF-12營養(yǎng)混合物（Ham’sF-12NutrientMixture）L-谷氨酰胺（Glutamine）是細胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)元素，但其在溶液中不穩(wěn)定，會自發(fā)降解，不含L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基，可以根據(jù)研究需要任意調整L-谷氨酰胺的用量，在使用時添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細胞的生長。 Ham’s F-12營養(yǎng)混合物（Ham’s F-12 Nutrient Mixture）初用于CHO細胞的無血清培養(yǎng)。

    細胞培養(yǎng)基的種類按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。（balancedsaltsolution，BSS）BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因為Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成份，參與細胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細胞結團。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎溶液，前者緩沖能力較弱，適合于密閉培養(yǎng)；后者緩沖能力較強，適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。表1-1幾種常用的BSS配方。Dulbecco’s 改良培養(yǎng)基增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及**酸鈉。天津iclean細胞培養(yǎng)基供應商家

靈活適配血清/無血清培養(yǎng)，DMEM/F12助力定制化實驗方案。湖北細胞培養(yǎng)基廠家

    門）冬氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸和甘氨酸7種NEAA，能降低細胞培養(yǎng)時細胞自身生產(chǎn)非必須氨基酸的副作用，有效促進細胞增殖代謝。葡萄糖可以根據(jù)研究需要，隨意調節(jié)葡萄糖的濃度，方便快捷。高糖型培養(yǎng)基普遍應用于生長快、粘附性低的細胞、雜交瘤的骨髓瘤細胞、克隆細胞、DNA轉染的轉化細胞、各種原代病毒宿主細胞、單一細胞的培養(yǎng)以及疫苗的生產(chǎn)，例如利用CHO細胞表達EPO和生產(chǎn)乙肝疫苗。低糖培養(yǎng)基更適合代謝作用較慢、依賴性貼壁細胞的培養(yǎng)。HEPES是一種優(yōu)良的生物緩沖劑，對細胞無毒性作用，添加HEPES的培養(yǎng)基能夠較長時間保持恒定的PH范圍，可以有效的防止培養(yǎng)液PH波動較大對細胞生長產(chǎn)生不利的影響。可用于無CO2培養(yǎng)箱。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑，用以持續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液的酸堿度，在低PH值時酚紅使培養(yǎng)液呈黃色，而較高的PH值時使培養(yǎng)液呈紫色，PH值～，**適合細胞培養(yǎng)。但酚紅也有一些缺點，研究表明酚紅可以模擬固醇類***（特別是雌***）的作用，因此在用到雌***敏感的細胞時（如乳腺組織），**好使用不含酚紅的培養(yǎng)基。酚紅會干擾流式細胞分析時候的檢測。此外，一些無血清培養(yǎng)基的配方中若存在酚紅會干擾鈉-鉀平衡。湖北細胞培養(yǎng)基廠家

近年來，公司不斷加大自主研發(fā)投入，積極引進人才和技術，并與國內(nèi)外多家科研院所以及醫(yī)院有著緊密合作，促進產(chǎn)學研成果轉化。

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