微管重組技術是體外構建紡錘體模型的基礎。通過在體外重組微管蛋白,可以形成類似于細胞內(nèi)紡錘體的微管結(jié)構。常見的方法包括:從牛腦或其他來源中純化微管蛋白,確保其純度和活性。在體外條件下,通過控制溫度、離子濃度等參數(shù),誘導微管蛋白組裝成微管。使用微管穩(wěn)定劑(如紫杉醇)或調(diào)節(jié)蛋白(如MAPs)穩(wěn)定微管結(jié)構,模擬細胞內(nèi)的微管動態(tài)變化。動力蛋白和調(diào)節(jié)蛋白是紡錘體功能的重要組成部分。通過在體外模型中添加這些蛋白,可以模擬紡錘體的動力學行為。常見的方法包括:添加動力蛋白(如dynein、kinesin)以模擬微管的運動和動力學行為。添加調(diào)節(jié)蛋白(如AuroraB、Mad2)以模擬紡錘體檢查點的功能。 紡錘體的異常會導致細胞分裂錯誤,進而引發(fā)染色體不穩(wěn)定性和遺傳性疾病。雙折射性紡錘體玻璃底培養(yǎng)皿
紡錘體的形成是一個復雜而精細的過程,涉及多種蛋白質(zhì)的參與和調(diào)控。在有絲分裂的前間期,細胞進入S期,中心體開始復制倍增,為接下來的紡錘體形成做準備。進入G2期后,中心體完成復制,并在細胞進入分裂前期時分離,每個中心體各自形成放射狀排列的微管,即星體。這些微管通過持續(xù)增加和丟失組成微管的微管蛋白亞基,實現(xiàn)微管的聚合和解聚,使紡錘體得以形成和維持。微管的組裝和去組裝過程受到多種調(diào)節(jié)蛋白的精確調(diào)控,如蛋白激酶、磷酸酶等。這些調(diào)節(jié)蛋白能夠影響微管蛋白的聚合和解聚速率,從而控制紡錘體的形態(tài)和穩(wěn)定性。此外,紡錘體的形成還依賴于動粒微管與染色體動粒的結(jié)合,這一過程由動粒上的驅(qū)動蛋白和動力蛋白介導,確保了染色體能夠被紡錘體正確地捕獲和牽引。 美國克隆紡錘體廠家紡錘體的形成與消失是細胞周期中高度動態(tài)的過程。
液晶偏振光顯微鏡是一種將液晶可變減速器、電子成像及數(shù)碼成像技術結(jié)合起來的成像系統(tǒng),能夠觀測到具有雙折性特征的細胞結(jié)構,如紡錘體和透明帶。Polscope成像系統(tǒng)無需對細胞進行固定和染色,因此能夠評估卵母細胞的質(zhì)量與紡錘體、透明帶等的相關性。在紡錘體卵冷凍研究中,Polscope成像系統(tǒng)可用于實時監(jiān)測冷凍過程中紡錘體的形態(tài)變化,評估冷凍保護劑的效果和冷凍速率對紡錘體的影響。此外,解凍后也可利用Polscope成像系統(tǒng)評估紡錘體的恢復情況和穩(wěn)定性,從而篩選出高質(zhì)量的卵母細胞進行后續(xù)操作。
減數(shù)分裂是生物體形成配子(精子和卵子)的過程,其特點是一次DNA復制后細胞連續(xù)分裂兩次,形成四個遺傳物質(zhì)相似的子細胞。在減數(shù)分裂過程中,紡錘體同樣發(fā)揮著至關重要的作用。在減數(shù)分裂Ⅰ的前期,同源染色體發(fā)生配對、聯(lián)會、交換和交叉,形成四分體。這一過程依賴于紡錘體的微管網(wǎng)絡,它確保了同源染色體能夠正確地配對和交換遺傳信息。隨后,在減數(shù)分裂Ⅰ的中期,染色體在紡錘絲的牽引下,排列在赤道板上。與有絲分裂不同的是,此時排列在赤道板上的染色體是同源染色體對,而不是姐妹染色單體。當細胞進入減數(shù)分裂Ⅰ的后期,同源染色體在紡錘體的牽引下分離,分別移向細胞的兩極。這一過程實現(xiàn)了同源染色體的分離,為后續(xù)的遺傳重組和配子形成奠定了基礎。在減數(shù)分裂Ⅱ中,紡錘體的作用與有絲分裂更為相似。姐妹染色單體在紡錘絲的牽引下分離,分別移向細胞的兩極。這一過程確保了每個子細胞都能獲得完整的染色體組,從而保證了配子的遺傳完整性。 紡錘體的形成需要多種蛋白質(zhì)的參與,包括微管相關蛋白和中心體蛋白等。
在有絲分裂中,紡錘體的形成與功能至關重要。首先,在有絲分裂前期,中心體復制并分離至細胞兩極,形成紡錘體的兩極。隨后,微管從兩極向中心區(qū)域延伸,形成紡錘體的主干。在中期,染色體在紡錘絲的牽引下,自動在赤道板排列整齊。當細胞進入分裂后期,紡錘體微管收縮,將染色體牽引至兩極,形成兩組數(shù)目相等的姐妹染色單體。這一過程確保了遺傳信息的準確傳遞,避免了染色體分離錯誤導致的遺傳異常。此外,紡錘體還決定了胞質(zhì)分裂的分裂面。在染色體分裂的同時,紡錘體中的一部分微管不隨染色體分裂到兩極,而是停弛在紡錘體中心,形成紡錘中心體。紡錘中心體的中心區(qū)域為兩組極性相反的微管交疊區(qū),稱為紡錘中心區(qū),它決定了接下來的胞質(zhì)分裂面。胞質(zhì)分裂開始于分裂后期的較晚期,一般結(jié)束于分裂末期后1-2小時,此期間兩個子細胞由中心顆粒體連接。紡錘體通過精確控制胞質(zhì)分裂面的位置,確保了細胞分裂的對稱性和穩(wěn)定性。 紡錘體微管的動態(tài)變化是細胞分裂周期的重要標志。武漢哺乳動物紡錘體起偏器
紡錘體的功能異??赡軐е录毎至彦e誤,引發(fā)遺傳疾病。雙折射性紡錘體玻璃底培養(yǎng)皿
Oosight影像分析系統(tǒng)采用液晶偏光成像技術,無需對卵母細胞進行染色,即可實時、清晰、高對比度地進行紡錘體結(jié)構和透明帶成像,對ICSI、核移植操作、卵母細胞質(zhì)量評價等有很好的輔助作用。
主要應用ICSI:在單精胞漿注射過程中定位初級卵母細胞,避免卵的破裂損傷,增強胚胎的發(fā)育潛能。卵評估:利用定量的分析數(shù)據(jù)對卵進行分級,改善對胚胎的選擇。體外成熟評估:在未成熟卵催化(IVM)過程判斷成熟期,判斷依據(jù)采用的是準確的識別紡錘體,而非不準確的極體。質(zhì)量控制:利用定量的分析數(shù)據(jù)對卵進行分級,改善對胚胎的選擇。
核移植:顯著提高核移植的成功率。由于在核摘除的過程可以清楚的看到核質(zhì),使得核移植的成功率增加了80%,并減少了線粒體DNA的摘除。卵冷凍研究:對冷凍的初級卵母細胞進行解凍前和解凍后的定量分析,從而判斷卵的發(fā)育力,改善妊娠率。紡錘體研究:檢測胚胎中紡錘體的發(fā)育過程,確定正常和非正常分裂率(只可用于搭配有培養(yǎng)箱的顯微鏡)??梢詫θ旧w非正常的或非整倍體的胚胎成像,從而選擇***的前體做PGD診斷。透明帶研究:測量卵母細胞的透明帶;準確測量紡錘體和透明帶中分子排列方向的差別變化,判斷紡錘體和透明帶是否處于正常狀態(tài) 雙折射性紡錘體玻璃底培養(yǎng)皿