皮克級(jí)數(shù)字ELISA

芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA產(chǎn)品

每個(gè)生物實(shí)驗(yàn)室都用得起的單分子免疫檢測(cè)

數(shù)字ELISA測(cè)量蛋白質(zhì)濃度遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)ELISA的能力源于兩種效應(yīng)：1）SiMoA對(duì)酶標(biāo)記的高度敏感性；以及2）通過(guò)數(shù)字化蛋白質(zhì)檢測(cè)可以實(shí)現(xiàn)的低背景信號(hào)。任何免疫測(cè)定的靈敏度由其靈敏度決定。檢測(cè)技術(shù)到標(biāo)簽，抗體親和力，試驗(yàn)背景，以及背景測(cè)量值的變異（%CV）27.SiMoA對(duì)酶非常敏感標(biāo)簽（圖2）為在數(shù)字ELISA中檢測(cè)亞飛摩爾濃度的標(biāo)記蛋白提供了基礎(chǔ)。也就是說(shuō)，對(duì)于給定親和力的抗體，其靈敏度為免疫測(cè)定將由測(cè)定背景決定，SiMoA的高標(biāo)記靈敏度有助于降低這種背景。對(duì)照實(shí)驗(yàn)表明，數(shù)字ELISA的背景來(lái)自于檢測(cè)抗體和酶的非特異性結(jié)合（NSB）與捕獲珠表面結(jié)合（補(bǔ)充表2）。AsSiMoA相比傳統(tǒng)檢測(cè)方法具有更高的標(biāo)記靈敏度，明顯減少了檢測(cè)抗體（~1nM)和酶標(biāo)記物（1–50pM)的需要，以檢測(cè)結(jié)合事件，與傳統(tǒng)方法相比（標(biāo)記試劑濃度~10nM)。降低的標(biāo)記物濃度減少了NSB到捕獲表面，從而導(dǎo)致背景信號(hào)明顯降低。 芯棄疾JX-8B單分子ELISA檢測(cè)產(chǎn)品，10ul樣本可同時(shí)測(cè)2-4個(gè)指標(biāo)！皮克級(jí)數(shù)字ELISA

    創(chuàng)新性的解決方案：芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA應(yīng)用范圍：各種高靈敏多重免疫檢測(cè)，可替代各種ELISA試劑盒，及其他免疫檢測(cè)產(chǎn)品。蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物在區(qū)分健康和疾病狀態(tài)方面的臨床應(yīng)用，而監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展則需要測(cè)量復(fù)雜樣品中的低濃度蛋白質(zhì)。目前的免疫測(cè)定方法測(cè)量的是蛋白質(zhì)的濃度高于10?12M，6而大多數(shù)在病癥7、神經(jīng)疾病8,9和接觸早期階段10中重要的蛋白質(zhì)的濃度被認(rèn)為在10?16到10?12M之間。需要提高靈敏度的例子包括：一個(gè)由一百萬(wàn)個(gè)細(xì)胞組成的1毫米3疾病，每個(gè)細(xì)胞分泌5000種蛋白質(zhì)到5升液體中。Simoa®由現(xiàn)任于哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院的DavidWalt教授作為科學(xué)創(chuàng)始人于2007年創(chuàng)立。DavidWalt是美國(guó)的工程院，藝術(shù)院和醫(yī)學(xué)院三院院士。2010年，DavidWalt將Simoa®技術(shù)以封面文章的形式發(fā)表在《NatureBiotechnology》上，此技術(shù)開(kāi)始為大眾所知并引起業(yè)界轟動(dòng)。Simoa技術(shù)（Single-moleculeArray，Quanterix公司）特點(diǎn)是通用陣列化檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)超高的靈敏度，較傳統(tǒng)ELISA方法能夠高出3個(gè)數(shù)量級(jí)，達(dá)到飛克級(jí)別(fg/ml)甚至更低。已拿阿茲海默癥的兩個(gè)FDAbreakthroughdevice；通常用于各種科研方向：神經(jīng)因子、蛋白組學(xué)、細(xì)胞因子等。 醫(yī)療檢測(cè)用數(shù)字ELISA檢測(cè)芯棄疾JX-8B單分子小型化ELISA檢測(cè)產(chǎn)品，低成本單分子檢測(cè)；

芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA產(chǎn)品

每個(gè)生物實(shí)驗(yàn)室都用得起的單分子免疫檢測(cè)

從TNF-α數(shù)字ELISA測(cè)定的檢測(cè)限為~150aM（2.5fg/mL），相當(dāng)于全血中的~600aM（10fg/mL）；市場(chǎng)上可用的ELISA對(duì)TNF-α的比較高靈敏度在血清中的LOD為21fM(0.34pg/mL）（補(bǔ)充圖3）。兩種方法的目標(biāo)蛋白零濃度尖峰均為為這些實(shí)驗(yàn)提供有用的陰性對(duì)照：25%的血清含有多種蛋白質(zhì)的微摩爾濃度，在這些高蛋白質(zhì)背景之上可以檢測(cè)到非常低濃度的目標(biāo)蛋白。我們還開(kāi)發(fā)了一個(gè)證明用于顯示低濃度核酸可以檢測(cè)到的DNA的主要數(shù)字分析方法，而無(wú)需復(fù)制目標(biāo)

單分子陣列化技術(shù)：磁珠捕獲與信號(hào)放大的**支撐，單分子陣列化技術(shù)作為數(shù)字ELISA芯片的底層架構(gòu)，通過(guò)微米級(jí)捕獲結(jié)構(gòu)與二次流原理，實(shí)現(xiàn)磁珠的高密度穩(wěn)定捕獲。在芯棄疾單分子芯片中，該技術(shù)使單個(gè)芯片承載數(shù)十萬(wàn)磁珠，每個(gè)磁珠作為**反應(yīng)單元，***放大熒光信號(hào)，降低背景噪聲。反應(yīng)后磁珠與量子點(diǎn)陣列的協(xié)同作用，進(jìn)一步提升檢測(cè)靈敏度，IL-6檢測(cè)中0.2pg/ml的低濃度樣本仍能呈現(xiàn)清晰的熒光信號(hào)梯度。該技術(shù)不僅確保了單分子級(jí)別的檢測(cè)精度，更通過(guò)陣列化設(shè)計(jì)實(shí)現(xiàn)高通量并行反應(yīng)，為低豐度蛋白的統(tǒng)計(jì)分析提供了充足的數(shù)據(jù)量，成為突破傳統(tǒng)ELISA檢測(cè)上限的關(guān)鍵技術(shù)，支撐芯片在超敏檢測(cè)與多重分析中的優(yōu)異表現(xiàn)。芯棄疾單分子芯片依托單分散陣列化技術(shù)，實(shí)現(xiàn)飛克級(jí)高靈敏檢測(cè)，可捕獲數(shù)十萬(wàn)反應(yīng)磁珠。

磁珠陣列化反應(yīng)的信號(hào)處理優(yōu)勢(shì)：磁珠陣列化反應(yīng)作為數(shù)字ELISA芯片的**環(huán)節(jié)，通過(guò)量子點(diǎn)標(biāo)記與熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）技術(shù)，實(shí)現(xiàn)信號(hào)的指數(shù)級(jí)放大。在IL-6檢測(cè)中，每個(gè)磁珠捕獲的抗原-抗體復(fù)合物攜帶多個(gè)量子點(diǎn)，單個(gè)熒光事件的信號(hào)強(qiáng)度較傳統(tǒng)ELISA提升10倍以上，使0.5pg/ml的低濃度樣本仍能產(chǎn)生***的熒光響應(yīng)。信號(hào)處理軟件通過(guò)多視場(chǎng)拼接與背景噪聲扣除算法，進(jìn)一步提升信噪比，確保弱陽(yáng)性樣本的準(zhǔn)確識(shí)別。這種“信號(hào)放大+智能處理”的雙重機(jī)制，使芯片在接近檢測(cè)極限的濃度區(qū)間仍能保持良好的線性關(guān)系，為臨界值樣本的精細(xì)判斷提供了技術(shù)保障。芯棄疾JX-8B單分子普惠化ELISA檢測(cè)產(chǎn)品，人人都用能得起的單分子檢測(cè)；生醫(yī)實(shí)驗(yàn)室數(shù)字ELISA檢測(cè)

多指標(biāo)高通量數(shù)字 ELISA 芯片單個(gè)樣本可測(cè) 2-8 個(gè)指標(biāo)，片內(nèi)反應(yīng)檢測(cè)推動(dòng)設(shè)備小型化。皮克級(jí)數(shù)字ELISA

    芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA產(chǎn)品每個(gè)生物實(shí)驗(yàn)室都用得起的單分子免疫檢測(cè)SiMoA通過(guò)將單個(gè)酶產(chǎn)生的熒光團(tuán)限制在極小范圍內(nèi)，從而能夠檢測(cè)到非常低濃度的酶標(biāo)記物體積（~50fL），導(dǎo)致熒光產(chǎn)物分子的局部高濃度。為了在免疫測(cè)定中實(shí)現(xiàn)這種定位，在第二步中，將珠子加載到一個(gè)陣列為離散的微升大小的孔（圖1C）。本研究中使用的2毫米寬陣列有~50,000個(gè)孔，孔徑為μm，孔深為μm。加載后的陣列在含有熒光酶底物液滴的情況下，用橡膠密封圈密封。Rissin等人，第3頁(yè)將每個(gè)微球隔離在飛升反應(yīng)室中。具有單一酶的微球標(biāo)記的免疫復(fù)合物在50飛升的反應(yīng)室中產(chǎn)生局部高濃度的熒光產(chǎn)物（圖1D）。通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)獲取陣列的時(shí)間變化熒光圖像，可以區(qū)分與單一酶分子相關(guān)的微球（“開(kāi)啟”孔）和不與酶相關(guān)的微球（“關(guān)閉”孔）；補(bǔ)充圖1顯示了“開(kāi)啟”和“關(guān)閉”孔的熒光直方圖。成像陣列可以成千上萬(wàn)的單個(gè)免疫復(fù)合物同時(shí)檢測(cè)。通過(guò)測(cè)定供試品中的蛋白質(zhì)濃度來(lái)確定計(jì)算含有珠子和熒光產(chǎn)物的孔數(shù)相對(duì)于含有珠子的孔數(shù)（圖1D）。使用SiMoA，濃度是因此，我們稱SiMoA應(yīng)用于檢測(cè)單個(gè)免疫復(fù)合物為數(shù)字ELISA。 皮克級(jí)數(shù)字ELISA