免疫組化。染色 免疫組化可以輔助病理診斷、指導(dǎo)診斷、評估預(yù)后，所以在做免疫組化過程中的質(zhì)控問題處理尤其重要［1］。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進，特別是即用型試劑盒的出現(xiàn)，使抗體的標(biāo)記更加簡便、快捷，更加規(guī)范化。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化染色技術(shù)是一項實驗性很強的技術(shù)，任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)......免疫組化可以輔助病理診斷、指導(dǎo)診斷、評估預(yù)后，所以在做免疫組化過程中的質(zhì)控問題處理尤其重要，隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進，特別是即用型試劑盒的出現(xiàn)，使抗體的標(biāo)記更加簡便、快捷，更加規(guī)范化。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化染色技術(shù)是一項實驗性很強的技術(shù)，任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都可以直接影響免疫組化結(jié)果。免疫組化病理實驗切片 染色等找融享生物 。安徽特殊染色免疫組化檢測哪里有
（1）ABC復(fù)合物的制備：（2）ABC法反應(yīng)原理6．SP或SAP法（過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素或過氧化物酶標(biāo)記的堿性磷酸酶染色）Streptavidin/peroxidaseorstrepta-vidin/alkalinephosphatase）※該法是ABC法基礎(chǔ)上的進一步改良，使卵白素與鏈霉（而非生物素）結(jié)合，而后再結(jié)合PO。它有4個亞基可與生物素結(jié)合，靈敏特異，背景低，成本低?，F(xiàn)在還有plus盒。優(yōu)點是：更簡便，放大倍數(shù)↑，等電點中性更適合組織。分子量小，穿透力↑。7．蛋白A—金法（Protein—Agoldmethod）~多用于電鏡8．雙重組化染色法應(yīng)用雙重免疫組織化學(xué)可在同一張切片，同一細胞或亞細胞結(jié)構(gòu)內(nèi)同時顯示兩種不同的抗原。9．免疫金—銀染色法（Immunogold—silverstainingIGSS）固定——見前述注意事項：1．固定劑的選擇：因組織而不同，注意質(zhì)量和性能。2．固定方式的選擇：①浸漬固定（參考文獻）②灌注固定（+后固定）③蒸汽固定免疫組化染色步驟（以ABC法為例）1．切片脫蠟入水，入PBS洗三次/15分鐘。2．封閉內(nèi)源性過氧化物酶。用新配置的（在PAS或—HCL緩沖液）室溫，30分鐘。3．水洗，入PBS，洗三次，每次5分鐘。4．減少非特異性著色用稀釋20倍的正常血清（產(chǎn)生二次抗體動物血清?。覝?，30分鐘。北京免疫組化實驗公司哪里有比較好的免疫組化服務(wù)融享生物。
免疫組化技術(shù)是利用已知的特異性抗體或抗原特異性結(jié)合的特點，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑通過借助顯微鏡的觀察，從而在抗原抗體結(jié)合部位確定組織細胞結(jié)構(gòu)的一門組化技術(shù)。在病理診斷、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究工作中免疫組化技術(shù)已成為非常重要的手段。免疫組化顯色是一種酶促反應(yīng)，它通過連結(jié)在抗原抗體復(fù)合物上的過氧化物酶或堿性磷酸酶與底物DAB發(fā)生反應(yīng)，生成有色的復(fù)合物沉淀在組織細胞中的抗原部位。由于標(biāo)本組織來源不同，細胞分化不一，抗原含量不等，顯色反應(yīng)所需時間不可能完全一致。整個免疫組化過程步驟較多，每步應(yīng)按操作要求嚴(yán)格操作，脫蠟一定要充分。每步PBS沖洗時間、次數(shù)一定不能省略，因PBS液內(nèi)含有鹽，
拍照
有條件的話比較好立即拍照，若不能及時拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。使用熒光顯微鏡注意嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程序;應(yīng)在暗室中進行檢查;防止紫外線對眼睛的損害，在調(diào)整光源時應(yīng)戴上防護眼鏡;檢查時間每次以1~2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降，熒光減弱;標(biāo)本受紫外線照射3~5min后，熒光也明顯減弱或褪色;激發(fā)光長時間的照射，會發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象;所以較多不得超過2~3h;熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時間，保護光源。天熱時，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再啟用時，須待燈光充分冷卻后才能點燃。天中應(yīng)避免數(shù)次點燃光源。關(guān)閉汞燈至少在開啟15-30分鐘后;標(biāo)本染色后立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發(fā);使用的玻片等載體，都必須厚度均勻，無明顯的自發(fā)熒光，如果使用油鏡，還必須保證鏡油為無熒光鏡油;電源比較好裝穩(wěn)壓器，否則電壓不穩(wěn)不只會降低汞燈的壽命，也會影響鏡檢的效果。
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經(jīng)驗總結(jié)編輯
做過病理實驗的人都知道，實驗看似容易，但真想把它做好，還是需要花上很長一段時間去積累和摸索經(jīng)驗。我從事病理實驗已有6年多了，在這段時間里，我做過許許多多病理相關(guān)實驗，剛開始啥也不懂，一味按照網(wǎng)上操作流程來做，但做的結(jié)果往往并不是十分理想，較好終結(jié)果未能達到預(yù)期的效果。經(jīng)過一段時間的瀏覽和學(xué)習(xí)，從一些在論壇內(nèi)學(xué)習(xí)、請教，并結(jié)合實踐操作，我經(jīng)歷了初級——查找資料和摸索方法；中級——問題求助和不斷總結(jié)；高級——難題解答和經(jīng)驗分享這三個階段，也學(xué)到了不少知識，積累了很多寶貴經(jīng)驗，與大家一起分享下。
關(guān)于掉片
HE、Masson、番紅O、Nissl、Mallory等染色方法很少有掉片現(xiàn)象；免疫組化和細胞凋亡檢測我們采用專門購買的防脫片，由于整個實驗流程比較長，在實驗過程中產(chǎn)生掉片是很正常的現(xiàn)象。對于容易掉片的組織，如：骨組織、腦組織、皮膚組織等掉片有時候是不可避免的。
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DAB顯色
背景的深淺和特異性染色的深淺均可以由DAB孵育條件決定。DAB顯色時間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時間，到出現(xiàn)特異性染色較強而本底著色較淺時即可沖洗；DAB顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長，需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間；此外，若很短時間就出現(xiàn)背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長封閉時間；DAB顯色時間很長（如超過十幾分鐘）才出現(xiàn)陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短（比較好一抗4℃過夜）；另一方面就是封閉時間過長。
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