１６ＳｒＲＮＡ 序列
分析技術(shù)的基本原理就是利用恒定區(qū)序列設(shè)計(jì)通用引物從微
生物樣本中擴(kuò)增出１６ＳｒＲＮＡ 的 基 因 片 段，通 過(guò) 克 隆 測(cè) 序、探
針雜交、酶切片段多態(tài)性分析或凝膠電泳等方 法獲 得 １６Ｓ
ｒＲＮＡ 序列信息，再與１６ＳｒＲＮＡ 基因數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列數(shù)據(jù)或
其他數(shù)據(jù)進(jìn)行同源對(duì)比及分析，從而鑒定樣本中可能存在的病
原菌種類(lèi)。目前絕大多數(shù)的研究都 是 先 將１６ＳｒＲＮＡ 反 轉(zhuǎn) 錄 為１６ＳｒＤＮＡ 再 進(jìn) 行 進(jìn) 一 步
的研究。也可以提取細(xì)菌總的 ＤＮＡ 之 后，利用細(xì)菌通用引物
對(duì)樣品總 ＤＮＡ 中的１６ＳｒＲＮＡ 基因進(jìn)行全長(zhǎng)擴(kuò)增，再對(duì) ＰＣＲ
產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步研究。 您喜歡16s 的這些特點(diǎn)嗎？重慶真核微生物16S測(cè)序公司哪里有
傳統(tǒng)的微生物鑒定方法，主要通過(guò)將微生物培養(yǎng)后依據(jù)形態(tài)學(xué)、生理生化反應(yīng)、生態(tài)學(xué)特征等進(jìn)行鑒別。 Orji 等指出這種方法只能檢測(cè)出約 1%的重要病原菌，而利用宏基因組學(xué)、高通量測(cè)序、系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析等
技術(shù)，自然界中 的致病菌都能得到研究。隨著基因測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，16S rDNA 擴(kuò)增子測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用
越來(lái)越，已成為研究大氣、水、油井等環(huán)境樣品中細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的重要手段。采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)樣本 １６Ｓ ｒＤＮＡ 片段進(jìn)行測(cè)序，可以獲得準(zhǔn)確的序列信息和更大的數(shù)據(jù)量，從而 在后續(xù)分析中獲得更加深入、和可靠的結(jié)果。 重慶真核微生物16S測(cè)序公司哪里有16s 18S ITS 多種測(cè)序供您選擇。
在過(guò)去的十幾年中，下一代測(cè)序(NGS)技術(shù)被
用于探索各種生態(tài)系統(tǒng)中微生物群落的多樣
性和組成結(jié)構(gòu)，對(duì)研究海洋、土壤、宿主等環(huán)境中
的微生物構(gòu)成有重要的指導(dǎo)作用，同時(shí)也是系統(tǒng)發(fā)
育和分類(lèi)學(xué)研究中一種使用的方法，特別是應(yīng)
用于不同的環(huán)境宏基因組學(xué)樣本中。隨著高通量
測(cè)序技術(shù)的不斷發(fā)展和參考數(shù)據(jù)庫(kù)的不斷更新，利
用核糖體操縱子作為 DNA 標(biāo)記可以揭示不同生態(tài)
系統(tǒng)中的微生物多樣性和組成。采用第二代高通量
測(cè)序平臺(tái)測(cè)定的16S/18S/ITS某個(gè)高變區(qū)域的序列，
可以反映環(huán)境樣品在細(xì)菌、、古菌等分類(lèi)方面
物種之間的差異。然而，針對(duì)不同的環(huán)境樣本，引
物的選擇和實(shí)驗(yàn)過(guò)程仍然需要更細(xì)致的驗(yàn)證。
16S rRNA 基因直接測(cè)序法：對(duì)微生物 16S rRNA 基因進(jìn)行測(cè)序時(shí)比較好進(jìn) 行全長(zhǎng)測(cè)序, 尤其是所測(cè)序列將要用于探針設(shè)計(jì) 和新物種確定時(shí)。另外, 采用正反向引物對(duì)所測(cè)序 列進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證可以確保序列的準(zhǔn)確性。但由于 目前測(cè)序費(fèi)用還比較高昂, 因此許多研究者也采 用測(cè) 16S rRNA 基因部分序列的方法進(jìn)行微生物 多樣性分析和平行樣品比較。研究表明, 400~600 堿基的序列足以對(duì)環(huán)境中微生物的多樣性和種群 分類(lèi)進(jìn)行初步的估計(jì), 但這樣短的序列通常不能 用于新物種鑒定和探針設(shè)計(jì)。上海融享生物科技有限公司測(cè)序的16s 很好。
用下一代測(cè)序技術(shù)(next generation sequencing，NGS)測(cè)定
16S/18S/ITS 某個(gè)可變區(qū)的序列，可以反映環(huán)境樣
品在細(xì)菌、、古菌等組成的微生物群落之間的
差異，對(duì)研究海洋、土壤、宿主等不同環(huán)境中的
微生物群落組成及動(dòng)態(tài)變化有重要的指導(dǎo)作用，同
時(shí)也是系統(tǒng)發(fā)育和分類(lèi)學(xué)研究中一種使用的方法。
ITS 的保守型表現(xiàn)為種內(nèi)相對(duì)一致，種間差異較明
顯，能夠反映出種屬間甚至菌株間的差異。此外，
ITS 序列片段較小(ITS1 和 ITS2 長(zhǎng)度分別為 350 bp
和 400 bp 左右，但不同物種之間存在一定差異)，
易于分析。也就是說(shuō)，ITS 具有更高的擴(kuò)增和測(cè)序
成功率以及分類(lèi)學(xué)分辨率，目前已被應(yīng)用于真
菌不同種屬的系統(tǒng)發(fā)育分析。 16s 的各種測(cè)序應(yīng)用領(lǐng)域還是不一樣的。重慶真核微生物16S測(cè)序公司哪里有
ITS 的多種測(cè)序總有一款是您滿(mǎn)意。重慶真核微生物16S測(cè)序公司哪里有
2000 年, M Manzano 等利用溫度梯度凝膠電泳的方法 分析 16S rRNA 對(duì)分離自食物中的利斯特氏菌進(jìn)行了鑒定。 2001 年, HJ Monstein 等利用溫度梯度凝膠 電泳和 PCR 擴(kuò)增 16S rRNA 的 V6 區(qū) ( 可變區(qū)) 片段的方法對(duì) 16 株腸球菌進(jìn)行了鑒定。2001 年, 沈永才等利用 16S rRNA 的 PCR 法鑒定了 8 株 雙歧桿菌, 并用 16S rRNA 熒光定量 PCR 法對(duì)雙 歧桿菌進(jìn)行了定量檢測(cè)。2002 年, A Manero 等對(duì) 利用 16S rRNA 探針雜交的方法鑒定腸球菌屬細(xì) 菌進(jìn)行綜述。2002 年, Y Woo- PatrickC 等通過(guò) 16S rRNA 序列分析的方法, 從一位菌血癥膽囊 炎患者體內(nèi)檢測(cè)到了唾液乳桿菌的存在。2003 年, Y Seto 等對(duì) 16S rRNA 序列特定長(zhǎng)度片段進(jìn) 行 分 析 , 對(duì) 人 體 糞 便 樣 品 中 嗜 酸 乳 桿 菌 ( Lactobacillus acidophilus) 的分布情況進(jìn)行了檢 測(cè)。2003 年, JR Byun 等利用分析 16S rRNA 和 23S rRNA 間區(qū)序列的方法對(duì)一株鼠李糖乳桿菌 ( Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103) 進(jìn)行了鑒 定, 并與干酪乳桿菌( L. casei) 、嗜酸乳桿菌( L. acidophilus) 和瑞氏乳桿菌( L. helveticus) 的 16S rRNA 和 23S rRNA 間區(qū)片段進(jìn)行了比較。重慶真核微生物16S測(cè)序公司哪里有